Fermentacion

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En las fermentaciones que se usaron para esta tesis, se tenia control sobre las siguientes variables: pH, velocidad de agitación, formación de espuma. Además se mide el porcentaje de oxígeno disuelto. Los pasos que hay que seguir para iniciar una fermentación son:
· Primeramente hay que calibrar el medidor de pH, ya que el valor medido por el electrodo y el medidor de pH puede llegar a variarcon el tiempo. La calibración se logra con sustancias llamadas buffers que tienen un valor constante de pH, que se toman como referencia para hacer los pequeños ajustes en el medidor. El medidor de oxígeno disuelto es también calibrado antes de iniciar la fermentación.
· Se coloca en el fermentador la fuente de nitrógeno. Además se agregan los electrodos para medir el porcentaje del oxígenodisuelto, el pH y el sensor de espuma. También se colocan las mangueras que servirán para la adición de ácido, base y antiespumante; así como las mangueras que sirven para la toma de muestra y las que servirán para la entrada y salida del oxígeno.
· El fermentador se esteriliza en una autoclave a una temperatura aproximada de 120°C y una presión de 1.5 Kg/cm2, durante aproximadamente 15 o 20 minutos.Esto se hace para eliminar cualquier microorganismo indeseable durante la fermentación. También se esterilizan los matraces que contienen la fuente de carbono, el ácido, la base y el antiespumante; así como todo el material necesario usado durante la fermentación como filtros de aire y pinzas para presionar las mangueras.
· Después de esterilizar el fermentador se conecta el electrodo que mide elporcentaje de oxígeno disuelto al medidor controlador para que comience a polarizarse, esto toma aproximadamente cinco horas.

· Se conecta todo el equipo necesario para la fermentación (los controladores de pH y de espuma, el medidor de oxígeno disuelto; las bombas peristálticas, el motor, etc.). No se deben retirar los electrodos del fermentador para evitar la contaminación del medio decultivo.

· Ya que se tienen todos lo medidores y controladores funcionando, así como el abastecimiento de oxígeno, se adiciona la fuente de carbono, esperando unos cuantos minutos para que se estabilice la lectura de los medidores. La entrada del oxígeno es controlada por una válvula que la mantiene a una presión constante de 2 Kg/cm2.
· Finalmente se agrega el inóculo, y se hacen los ajustesfinales. Aquí comienza la fermentación.

· Durante la fermentación, se debe tomar una muestra del medio cada 4 horas, para medir el crecimiento, y la formación de producto. Se debe vigilar constantemente que el equipo funcione correctamente durante la fermentación.
En la figura 4.3 se puede ver un bosquejo de la mayoría de los medidores, controladores con los que cuenta el fermentador. Las bombasperistálticas obviamente van conectadas a sus respectivos controladores. A continuación se listarán los materiales usados durante la fermentación :
· Fermentador Applikon de tres litros, esterilizable en autoclave.
· Motor, con una velocidad de agitación de 0 a 1250 r.p.m.
· Medidor controlador del motor, (Applikon).
· Medidor controlador de pH, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Medidor controladorde oxígeno, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Controlador antiespumante, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Electrodo polarográfico de oxígeno, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Electrodo de pH, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Sensor de espuma, (Cole Parmer Instrument Co.).
· Bombas peristálticas (Masterflexs de velocidad fija).
· Válvula para mantener el oxígeno de alimentación al fermentadorconstante, Norgrem de
México.
· Matraces, Mangueras, pinzas, etc.

2. MEDICION DE LAS CONCENTRACIONES DE BIOMASA Y ASTAXANTINA.
Para la medición de biomasa se utilizan dos métodos principalmente:
Espectrofotometría (absorbancia) y peso seco.
El método de espectrofotometría o medición de absorbancia consiste en pasar un haz de luz de determinada longitud de onda a través de una muestra del...
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