Fosfatasa alcalina

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PRACTICA N° 7
FOSFATASA ALCALINA

I. INTRODUCCION

La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo, cuya función depende del tejido en el que se encuentre y cuya actividad se manifiesta mediante la hidrólisis de los monoesteres del acido ortofosfórico en medio alcalino. la fosfatasa alcalina es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatosde varios tipos de moleculas como nucleótidos y proteínas. el proceso de eliminar el grupo fosfático denomina desfoforilacion.

En el adulto la fosfatasa alcalina proviene en parte del hígado y en parte del hueso, dando lugar a distintas insoenzimas cuyas actividades en suero se pueden encontrar elevadas como respuesta a diversas condiciones fisiológicas o patológicas.

Entre las patologíasque afectan al actividad sérica de fosfatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas metasticos en hígado y en hueso, colestasis biliar, fenómenos osteoblasticos, trastornos de mala absorcion acompañados ede lesiones ulcerosas (donde la deficiencia de vitamina D produce osteomalacia con el consecuentemente aumento de fosfatasa alcalina ósea) en incluso lesiones en vías de reparación tales comoinfarto agudo de miocardio, infarto pulmonar o renal.

II. OBJETIVOS
* Realizar la determinación de fosfatasa alcalina
* Interpretar los resultados obtenidos.
* Adquirir destreza y habilidad en este método colorimétrico

III. MATERIALES Y REACTIVOS
* Espectrofotómetro
* Cubetas
* Reloj
* Pipeta
* Frasco ampolla* Algodón
* Agua deestilada

IV. PARTE EXPERIMENTAL

EXPERIMENTO N°1: DOSAJE DE FOSFATASA ALCALINA

Fundamento del Metodo
La fosfatasa alcalina se desdobla al fenil fosato de sodio alcalino tamponado con aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reacción con 4 aminoantipirina y ferrocianuro como agente oxidante. El color desarrollado es directamenteproporcional a la actividad enzimática y se mide a 520 nm.

Grafico del procedimiento

6.1. Tomar la muestra problema, (sangre venosa) llevar a centrifuga a 2000rpm por 5 minutos

En los tubos colocar
| BLANCO | STÁNDAR | MUESTRA |
Sustrato | 0,5ml | 0,5ml | 0,5ml |

Colocar en baño de agua a 37 °C unos minutos. Luego añadir:
| BLANCO | STÁNDAR | MUESTRA |
Suero | - | 50 ul | - |Standard | - | 50 ul | - |
Mezclar por agitación suave e incubar exactamente 10 minutos y agregar:

| BLANCO | STÁNDAR | MUESTRA |
Reactivo de color | 2,5 ml | 2,5ml | 2,5ml |

Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Retirar los tubos del baño y leer en espectrofotómetro a 520 nm llevando el aparato a cero absorbancia con agua destilada.

V. RESULTADOS:

5.1. Enla presente tabla se muestra los resultados de las absorbancias de las respectivas muestras.
MUESTRA | ABSORBACIA |
BLANCO | 0,039 |
STANDAR | 0,188 |
HOMBRES | 1 | 0,275 |
MUJERES | 1 | 0,210 |
| 2 | 0,219 |

5.2. CÁLCULOS
Fosfatasa alcalina UI/I = Factor x (M-B)

Factor =200UI/l S-B

5.3. En la presente tabla semuestra los valores de fosfatasa alcalina teniendo en cuenta El factor es 1142.8

MUESTRA | ABSORBACIA | Valores ALP Ul/l |
HOMBRES | 1 | 0,275 | 269.5 |
MUJERES | 1 | 0,210 | 195.3 |
| 2 | 0,219 | 205.7 |

VI. ANALISIS DE RESULTADO

Valores de Referencia

Adulto: 68 – 160 UI/I
Niños: 100 – 250 UI/I

MUESTRA | Absorbacia | Valores ALP Ul/l | Edad | Valores normales |promedio |
HOMBRES | 1 | 0,275 | 269.5 | 21 | ↑ | 269.5 |
MUJERES | 1 | 0,210 | 195.3 | 20 | ↑ | 200.5 |
| 2 | 0,219 | 205.7 | 23 | ↑ | |


A. Existe una diferencia considerable entre el valor promedio de mujeres que es menor (200.5) que el de los hombres (269.5) debido a que los jóvenes varones en crecimiento aumentan las fosfatasas...
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