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PRINCIPIO DEL METODO
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitronilfosfato (pNPP) a PH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la siguiente reacción.
p -Nitrofenilfosfato + H2O ____FAL___ p-Nitrofenol + fosfato
La velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalinaen la muestra ensayada
REACTIVOS
R1TAMPON | Dietanolamina (DEA) PH 10,4 1mmol/L CLORURO DE MAGNESIO0,5mmol/L |
R2SUBSTRATO | p-Nitrofenilfosfato (pNPP) 10mmol/L |
MATERIAL
-tubos de ensaye
-pipetas automáticas
-puntillas
-guantes
-bataMUESTRAS
Suero o plasma heparinizado
Suero libre de hemolisis, separado de los hematíes, lo antes posible.
Estabilidad: 3 días a 2 – 8 °c
PROCEDIMIENTO
1°-Condiciones del ensayo
Longitud deonda--------------------------------------------405nm
Cubeta---------------------------------------------------------1 cm paso de luz
Temperaturaconstante------------------------------------25°C/30°C/37°C
2°-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire
3°-Pipetear en una cubeta:
RT (Ml) | 1,2 |
MUESTRA (Ul) | 20 |
4°-Mezclar, incubar 1 minuto.
5°-Leer laabsorbancia (a) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6°-Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (^A/min)CALCULOS
^A/min x 3300 = U/L de FAL
Unidades: la unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 umol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentraciónse expresa en unidades por litro (U/L)
FACTORES DE CONVERSION DE TEMPERATURAS
TEMPERATURA DE FACTOR PARA CONVERTIR A
MEDICION...
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitronilfosfato (pNPP) a PH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la siguiente reacción.
p -Nitrofenilfosfato + H2O ____FAL___ p-Nitrofenol + fosfato
La velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalinaen la muestra ensayada
REACTIVOS
R1TAMPON | Dietanolamina (DEA) PH 10,4 1mmol/L CLORURO DE MAGNESIO0,5mmol/L |
R2SUBSTRATO | p-Nitrofenilfosfato (pNPP) 10mmol/L |
MATERIAL
-tubos de ensaye
-pipetas automáticas
-puntillas
-guantes
-bataMUESTRAS
Suero o plasma heparinizado
Suero libre de hemolisis, separado de los hematíes, lo antes posible.
Estabilidad: 3 días a 2 – 8 °c
PROCEDIMIENTO
1°-Condiciones del ensayo
Longitud deonda--------------------------------------------405nm
Cubeta---------------------------------------------------------1 cm paso de luz
Temperaturaconstante------------------------------------25°C/30°C/37°C
2°-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire
3°-Pipetear en una cubeta:
RT (Ml) | 1,2 |
MUESTRA (Ul) | 20 |
4°-Mezclar, incubar 1 minuto.
5°-Leer laabsorbancia (a) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6°-Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (^A/min)CALCULOS
^A/min x 3300 = U/L de FAL
Unidades: la unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 umol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentraciónse expresa en unidades por litro (U/L)
FACTORES DE CONVERSION DE TEMPERATURAS
TEMPERATURA DE FACTOR PARA CONVERTIR A
MEDICION...
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