Fotocolorimetria

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INFORME DE BIOQUIMICA


CURVA DE CALIBRACIÓN POR FOTOCOLORÍMETRIA
Universidad Nacional de Colombia
Sede Medellín



DATOS OBTENIDOS.

Tabla 1. Espectro de absorción
Longitud de onda λ(nm) Absorción
420 0,058
440 0,058
460 0,083
480 0,120
500 0,165
520 0,195
540 0,206
560 0,199
580 0,179
600 0,150
620 0.121


Tabla 2. Curva de calibración.

Tubo Solución patronSolución problema Solución salina Reactivo de biuret Absorción Concentración (mg/ml)
Blanco 2,0ml 0ml 0 0
1 0,1ml 1,9ml 4ml 0,014 0.05
2 0,3ml 1,7ml 4ml 0,049 0,15
3 0,5ml 1,5ml 4ml 0,084 0.25
4 0,7ml 1,3ml 4ml 0,109 0.35
5 0,9ml 1,1ml 4ml 0,125 0.45
6 1,2ml 0,8ml 4ml 0,158 0.6
7 0,5ml 1,5ml 4ml 0,049 0.16
8 1,0ml 1,0ml 4ml 0,110 0.38
9 1,2ml 0,8ml 4ml 0,136 0.47

ANALISIS YDISCUSIÓN DE RESULTADOS.

PREGUNTAS
ESPECTRO DE ABSORCIÓN

Reporte la tabla obtenida en el procedimiento 4.2 en la guia y elabore una gráfica de “A vs. λ”.




1. ¿Qué interpretación le puede dar a la forma de la gráfica?

A partir de esta grafica podemos observar la longitud de onda en la cual el compuesto absorbe con mayor intensidad la energía, en este caso hay una mayor absorción deenergía en un rango de 460 a 540 nm, y su máxima absorción se encuentra en los 540nm.

2. ¿En cuáles longitudes de onda la sustancia coloreada del experimento absorbe energía?

La sustancia absorbe energía desde el momento en que se le adiciona el colorante y en los momentos en que se hace más intensa la absorción es en el rango mencionado anteriormente (460 a 540nm de longitud)

3. ¿Podríaconsultar la estructura o forma molecular de la sustancia coloreada?
Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali (compuesto químico de carácter básico) concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret, de fórmula:

Debido a dicha reacción fue que observamos que al agregar el reactivo de sulfato de cobre y la albúmina precipito a una coloración violeta. Quedando en elfondo del tubo una tonalidad azul cielo reacción positiva.

4. ¿Por qué no se le puede tomar un espectro de absorción a la albúmina sola?
La albumina es una sustancia incolora, es por ello que no se toma la albumina sola entonces es necesario agregar el reactivo de biuret, el cual se coordina con los enlaces peptídicos, formando así un complejo de color violeta. El reactivo del Biuret llevasulfato de Cobre, y éste en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos de la albumina formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas, lo que facilita y da lecturas más precisas de concentración.

CURVA DE CALIBRACION
Reporte la tabla referida en el numeral 4.3.5 en la guía y elabore una gráfica de “A vs.C”.




1. ¿Qué interpretación se le puede dar a la forma de la gráfica?

La idea de la gráfica es que nos permita determinar de una manera más precisa la concentración desconocida que queremos hallar a través de la máxima longitud de onda determinada. Esta grafica nos muestra entonces la absorbancia en función de la concentración, en teoría la recta debe ser lineal, para tener mayorcerteza sobre la concentración pero durante la realización del experimento se pudieron haber presentado varios errores que afectaron las condiciones del experimento y presentando variaciones en la recta.

2. ¿Por qué razón se eligió una sola longitud de onda para hacer todas las mediciones? Y ¿por qué tiene que ser la de la máxima absorción?

Para determinar la concentración de una solución seelige, en general, la máxima longitud de onda, pues en éste punto el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima, y por esta misma razón se elige ésta sola longitud de onda

3. ¿Qué significado físico tiene la pendiente de la gráfica?
La pendiente de la curva de calibrado lo que muestra es la sensibilidad de la curva por ende en una curva de calibración se debe apuntar a que sea...
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