Fraccionamiento celular , tecnicas citoquimicas y tecnicas de radioisotopos

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  • Publicado : 26 de septiembre de 2010
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FRACCIONAMIENTO CELULAR
Utilizando procedimientos mecánicos suaves, denominados HOMOGENEIZACION, las membranas plasmáticas de las células pueden romperse de modo que liberen su contenido. Primero,se rompen las células con ondas sonoras de alta frecuencia; segundo, se usa un detergente suave para generar orificios en la membrana plasmática; tercero, se fuerza a las células a través de unpequeño orificio utilizando alta presión; y cuarto, ruptura de las células entre un embolo que gira ajustadamente y las paredes de un tubo de cristal.
La CENTRIFUGACION es el procedimiento utilizado paraseparar un homogeneizado en diferentes partes o fracciones. El homogeneizado se coloca en tubos de ensayo y se rota a altas velocidades en una centrifuga o en una ultracentrífuga.
En la CENTRIFUGACIONDIFERENCIAL, las centrifugaciones se vuelven más repetitivas a velocidades cada vez más elevadas, se fraccionaran los homogeneizados celulares en sus componentes, se separaran en base a su tamaño y sudensidad. Los componentes de mayor tamaño y de densidad mas elevada experimentan la mayor fuerza centrifuga y se mueven con mayor rapidez. SEDIMENTAN para formar un precipitado en la base del tubo,mientras que los componentes más pequeños y menos densos se mantienen en suspensión, en la parte denominada sobrenadante.(2)
TECNICAS CITOQUIMICAS
La citoquímica se dedica a la identificación ylocalización de los compuestos químicos y macromoléculas dentro de las células, basándose en métodos de reacciones colorimétricas, las enzimáticas ó de inmunofluorescencia se averigua la composiciónbioquímica de las estructuras celulares, su localización y su funcionamiento, como la Reacción de Feulgen, verde janus B, rojo oleoso, Sudán rojo, Técnica de Schiff, entre otros.(3)(4)
Las REACCIONESENZIMATICAS: son específicas y controladas, dependen de factores como: temperatura, pH y la presencia de sales, son difíciles de ver a simple vista
INMUNOFLUORECENCIA:
La inmunofluorescencia es una...
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