Fraccionamiento celular

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  • Publicado : 14 de septiembre de 2010
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El fraccionamiento celular es usado para investigar la bioquímica y fisiología de organelos fuera del ambiente complejo de la célula intacta. El objetivo principal de este experimento es aislar loscloroplastos, núcleo y mitocondria del tejido de plantas por el método de fraccionamiento celular. Los otros objetivos son examinar esas fracciones microscópicamente y estimar el coeficiente desedimentación de los cloroplastos.

El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las células separando las organelas principales de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas. Elinstrumento usado para fraccionar las células es la centrífuga capaz de girar a diversas velocidades. La más poderosa, llamada ultracentrífuga puede dar vueltas tan rápidamente como 80.000revoluciones por minuto (RPM) y aplicar fuerzas sobre las partículas de 500.000 veces mayores que la fuerza de la gravedad (500.000g).

El fraccionamiento celular comienza con la homogeneización, o sea laruptura de la célula. El objetivo es romper las células sin dañar severamente sus organelas. El homogenato se centrifuga lográndose la separación de las partes de la célula en dos fracciones: el pelletque consiste en las estructuras más grandes depositadas en el fondo del tubo y el sobrenadante constituido de partes más pequeñas suspendidas en el líquido por encima del pellet. El sobrenadante estransvasado a otro tubo y centrifugado otra vez. El proceso es repetido incrementando la velocidad en cada paso. De esta manera se consigue recolectar componentes más pequeños de los sucesivos pellets.DETERMINACIÓN DEL COEFICIENTE DE SEDIMENTACIÓN
1. Determine el coeficiente de sedimentación para los cloroplastos que inicialmente estaban en la parte superior de la suspensión y luego de lacentrifugación se movieron al tope de l “pellet”. Para determinar S, calcule las distancias X1 y X2. Como de se demuestra en la fig. 10.3;
X1= radio del rotor- A; y X2= radio del rotor-B. Anote los...
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