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Páginas: 7 (1524 palabras) Publicado: 12 de diciembre de 2014
DETERMINACION DE PROTEINAS EN LECHE POR ESPECTROFOTOMETRIA MEDIANTE EL METODO DE BIURET

FUNDAMENTO TEÓRICO:

COLORIMETRÍA

La colorimetría es la ciencia que estudia la medida de los colores y que desarrolla métodos para la cuantificación del color, es decir la
obtención de valores numéricos del color.



ESPECTROFOTOMETRÍA

Se denomina espectrofotometría a la medición de lacantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda, de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. La principal aplicación de la espectrofotometría es la determinación de las concentraciones ya sea de sustancias químicas o de microorganismos presentes en una solución.


¿COMO FUNCIONA UN ESPECTROFOTÓMETRO?

El funcionamiento deun espectrofotómetro consiste
básicamente en iluminar la muestra con luz blanca y
calcular la cantidad de luz que refleja dicha muestra
en una serie de intervalos de longitudes de onda.

LEY DE BEER-LAMBERT

Es una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado. La ley de Beer tiene en cuenta el área y el número de partículas qué atraviesaun haz de luz, deduciendo de esto la energía que queda atrapada.
La ley de Beer-Lambert relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con la intensidad saliente después de que en dicho medio se produzca absorción. La relación entre ambas
intensidades puede expresarse a través de la siguiente relación:




MÉTODO DE BIURET

El método comprende un ensayo colorimétrico de un paso dondese cuantifica la formación de un Complejo estable entre proteínas y cobre (II). El complejo presenta un color violeta característico,
que se puede observar a 310nm o 540-560nm, el cual se da por la coordinación de un átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno. El complejo se basa en la desprotonación de los grupos amida para formar el enlace con el cobre (II) o por el establecimiento de unenlace coordinado entre el metal y los pares de electrones libres de los átomos de oxigeno y de nitrógeno del péptido. Después de la adición del reactivo de cobre se requiere de tiempo para desarrollar una coloración de Biuret estable; es necesario considerar la posible influencia de aminoácidos libres que forman buffer en configuración tris y amoniaco.

¿EN QUE CONSISTE LA REACCIÓN DEL BIURET ?El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la concentración de dos moléculas de urea con eliminación de amonio.

Si una solución fuertemente alcalina de sulfato cúprico se añade a una solución de proteína donde se forma un complejo entre el ion cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración violeta-purpura, que representa un máximo de adsorción540nm.
LAS CARACTERISTICAS MÁS IMPORTANTES DE LA REACCION SON:
La reacción del Biuret se aplica, a partir de los tetrapéptidos, a todos los péptidos y proteínas.
Su rango de determinación es de 1 a .
No depende de la composición de aminoácidos.
Algunos compuestos ( dan la reacción.





A) CASEINA
La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, ácido pantoteico yvitaminas A, D y k), minerales (calcio, potasio, sodio, fosforo y metales en pequeñas cantidades), proteínas (incluyendo todos los aminoácidos esenciales), carbohidratos (lactosa) y lípidos. Los únicos elementos importantes de los que carece la leche son el hierro y la vitamina C.
Las proteínas se pueden clasificar de manera general en proteínas globulares y fibrosas. Las proteínas globulares sonaquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no establecen interacciones intermoleculares como son los puentes de hidrogeno (característico de las proteínas fibrosas) siendo solubilizadas en suspensiones coloidalesEn al leche hay tres clases de proteínas: caseína, lactato albuminas y lactato globulinas (todas globulares).
La caseína es una proteína conjugada de la leche del tipo...
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