Genetica bacteriana

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Laboratorio Nº4

Genética Bacteriana

Introducción

Para comprender el crecimiento, desarrollo y reproducción de un organismo es necesario entender el funcionamiento y estructura de los genes (genotipo). La variación en el genotipo puede producir cambios en la estructura y funcionamiento de la célula.

La base de la variabilidad genética es generada por las mutaciones, las cuales sepueden definir como “una alteración en la secuencia del DNA de un individuo que se transmite por herencia a sus descendientes. Se producen por: errores en la replicación, la alteración espontánea de nucleótidos o debido a la acción de agentes físicos o químicos (mutágenos)” [1].

En muchos casos, las mutaciones producen cambios fenotípicos en el organismo, los cuales pueden ser perjudiciales,neutros, o pueden ser también cambios beneficiosos.

Estas mutaciones pueden ser espontáneas o inducidas.

Las mutaciones espontáneas, pueden surgir como consecuencia de la acción natural, mientras que las mutaciones inducidas son producidas en laboratorios, y consisten en exponer a los microorganismos a agentes mutagénicos químicos o físicos que condicionan la mutación de ellos.

Las mutaciones sepueden producir principalmente por tres métodos: transformación (transferencia de genes bacterianos que implica DNA libre)2, transducción (transferencia de genes del huésped de una célula a otra por medio de un virus)2 y conjugación (transferencia de genes de una célula procariótica a otra por un mecanismo que implica contacto célula-célula y un plásmido)2; estas mutaciones son la mayor fuentede evolución.

Una mutación se observa como un cambio heredable repentino en el fenotipo de un organismo. Hay dos tipos de mutaciones: las selectivas y las no selectivas. Una mutación selectiva confiere al mutante una cierta ventaja en determinadas condiciones ambientales, de modo que la descendencia de la célula mutante es capaz de superar y sustituir a las células progenitoras. Un ejemplo demutación selectiva es la resistencia a un antibiótico. Es fácil detectar y aislar este tipo de mutantes escogiendo las condiciones ambientales apropiadas. Mientras que las mutaciones no selectivas no tienen no tienen la ventaja de las que sufren mutación selectiva.

Este laboratorio tiene por objetivo aislar mutantes de Serratia marcescens, y de esta manera determinar el porcentaje de poblaciónresistente a un determinado antibiótico (estreptomicina) y reconocer el tipo de mutación observada.
Materiales y Métodos

Experimento: Aislamiento de mutantes espontáneos.

- Materiales:

• Cultivo líquido (de 24 horas) de una cepa de Serratia marcescens sensible a 0,01 mg/ml de estreptomicina.

• 6 placas de agar tripticasa sin estreptomicina.

• 5 placas de agar conestreptomicina: [0 mg/ml, 0.01 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.5 mg/ml y 1.0 mg/ml]

• Blancos de dilución estéril.

• Etanol.

• Mechero.

• Micropipeta.

• Puntas desechables.

• Rastrillo.

- Método:

El experimento se realizó en dos etapas:

➢ Primera etapa: “Diluciones seriadas de Serratia marcescens”

-Preparación del Área y Elementos de trabajoCon el propósito de evitar contaminaciones durante el desarrollo de la experiencia, es que, se procede a limpiar la mesa de trabajo y manos con etanol, como así mismo con alcohol algunos elementos accesorios que participan en la manipulación.

-Gama Operacional

El trabajo se inicia con la extracción de 100 µl de cultivo, logrados con una micropipeta previamente calibrada.Para extraer el cultivo se utiliza una micropipeta con las respectivas puntas desechables (una por cada extracción de muestra). Una vez colocada la punta desechable en la micropipeta, se toma una muestra directamente del tubo con cultivo de S. marcescens; el tubo se destapa, se flamea en el mechero y se extrae un volumen de cultivo de 100 µl que será vertido en los tubos que contienen...
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