Helicobacter pylori

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EXAMEN DE LAS PLACAS

El tiempo de incubación ideal es de 48 horas, aunque si el caso lo requiere, se pueden
examinar a las 18-24 horas.

Las colonias sospechosas pueden observarse planas, no hemolíticas de aspecto acuoso,
grisáseas, con bordes irregulares y con tendencia a diseminarse. Muchas veces se pueden
ver incoloras. Se les debe realizar una identificación presuntiva parasu posterior
confirmación y tipificación.


IDENTIFICACION PRESUNTIVA

Tinción de Gram: debido a que este microorganismo no se tiñe bien con safranina, se
recomienda el uso de carbolfucsina al 0,8% como coloración de contraste. Teniendo en
cuenta la morfología característica, es posible realizar solo la coloración simple con este
colorante.

Catalasa: se debe colocar sobreun portaobjetos limpio una colonia de un cultivo fresco,
agregar una gota de peróxido de hidrógeno al 3 %. Una reacción positiva se evidencia por la
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formación de burbujas producto de la liberación de oxigeno a partir de la reducción del
peróxido de hidrógeno.

Oxidasa: se debe utilizar un buen inóculo que se coloca en un tubo de hemólisis
conteniendo 0,2 ml de agua destilada ala que se le introduce un disco impregnado en la
solución de oxalato de p-aminodimetilamina. La enzima, citrocromo oxidasa es convertida a
su forma activa por la transferencia de electrones al oxigeno molecular. En presencia de
oxigeno molecular un gran número de electrones pueden ser transferidos por el sistema
citocromo oxidasa a una cantidad de compuestos orgánicos, entre ellos a lap-
aminodimetilamina.Una reacción positiva se evidencia por el desarrollo de color rojo.

Motilidad: se realiza por microscopía óptica, de contraste de fase o campo oscuro donde se
observa microorganismos espiralados o con forma de S con movimientos en espiral o
tirabuzón.


IDENTIFICACION FINAL

Crecimiento a 42-43°C y a 25°C: suspender al microorganismo en soluciónfisiológica estéril
hasta una densidad óptica del # 1 de la escala de Mac Farland.

Sembrar 0,5 ml de la suspensión en dos tubos con caldo brucella, incubar uno a 42-43°C y el
otro a 25°C (temperatura ambiente). Controlar a las 48 horas si hubo o no desarrollo.

Se puede usar placas de agar sangre o medios para Campylobacter.

Sensibilidad al ácido nalidíxico y cefalotina: lasuspensión anterior (1 en la escala de Mac
Farland) se siembra con hisopo sobre la superficie de una placa de agar sangre, agar para
antibiograma u otro medio para Campylobacter, colocar un disco de ácido nalidíxico de 30
µg. y un disco de cefalotina de 30 µg.

Se incuba 48 horas y se observa si hay halo de inhibición o no de manera de determinar si
la cepa es sensible a los antimicrobianosestudiados.

Hidrólisis del hipurato: suspender una ansada de la cepa en 400ul de una solución hipurato
de sodio al 1%. Luego de incubar a 37°C durante 2 horas, se le agrega 200ul de solución de
ninhidrina al 3,5% en acetona-butanol 1:1 por la pared del tubo, se deja en reposo a 37ºC
observándolo entre 10 minutos y 2 horas. La aparición de una coloración azul-púrpura indica
una reacciónpositiva que revela la presencia de glicina, producto final de la hidrólisis del
hipurato.

Producción de ácido sulfhídrico: se determina depositando una ansada en el centro de la
columna del tubo del medio para SH2 (medio de Lior. Los tubos se mantienen por 4 horas a
temperatura ambiente. La aparición de una coloración negra alrededor del inóculo indica
una reacción positiva.La reacción se basa en la liberación de ácido sulfhidrico por acción enzimatica de los
aminoácidos que contienen azufre, y se pone en evidencia por indicadores como sulfato
ferroso, tiosulfato de sodio, etc.

En caso de dudas, la incubación puede prolongarse a temperatura ambiente o a 37°C.
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Una alternativa consiste en usar medio de cultivo TSI o Kligler incubando en...
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