HERRAMIENTAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO

Páginas: 12 (2754 palabras) Publicado: 6 de febrero de 2016
HERRAMIENTAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO
Se deben determinar patrones de herencia de las diversas enfermedades genéticas (mendeliana, asociado a un cromosoma, cromosopatía, no mendeliana: asociación y fxs de riesgo). Mendeliana: saber si el gen está identificado o no. El diagnóstico se puede hacer de manera: directa: encontrar mutación en el sitio específico del daño de DNA.Indirecta: pruebas bioquímicas, marcadores cercanos a mutación, se sabe solo el cromosoma, no el gen, se hace diagnóstico por patrón de segregación
Diagnóstico directo: Gen y mutación o polimorfismo identificados. Se estudian los cambios a estructura primaria del DNA: puede ser cambio de tamaño: hay polimorfismo de secuencia o de longitud (secuencias que se repiten, muchas copias)…se debedeterminar el número de copias; o el cambio puede ser cambio de una base nitrogenada por otra. -Cambios en propiedades fisicoquímicas del DNA (no necesariamente con secuenciación directa si no con estudios que los determinen y se sabe que es por cambios en la secuencia). Ejm: metodología de polimorfismos de hebra simple, el cambio hace que la temperatura de fusión cambie, entonces los cambios en el DNAhace que cambie el patrón de migración, por este cambio de patrón… por electroforesis se puede determinar si hay o no polimorfismo o una mutación. -Cambio en productos génicos (proteínas…) ya es una manera indirecta. -Máximo nivel de precisión, pues la secuenciación del DNA
Herramientas para el diagnóstico clínico directo: (para diagnóstico molecular de patologías de carácter genético):Básicamente todas consisten en la extracción del DNA y RNA y su purificación, a pesar de que no se necesitan que estén en una alta pureza, enzimas de restricción para cortarlo, electroforesis técnica de separación, hibridación notas técnicas, PCR, Secuenciación directa.
Fuentes de DNA: de cualquier tipo de célula que tengan núcleo, sangre, saliva, semen, dientes, cabello, orina… cantidad de tejidodisponible: hasta de microgotas de sangre, excrementos: células epiteliales (criminología)… entonces la cantidad de DNA, depende de tamaño de muestra.
Cómo se extrae: 5 pasos:
1 Romper las membranas: Se tiene un reactivo, Para sangre por ejemplo, se tiene un buffer de lisis de glóbulos rojos; primero deshacerse de los eritrocitos, se toma la muestra de sangre, se le adiciona ese buffer, normalmente esuna solución hipotónica que hace que se revienten los glóbulos rojos, se centrifuga eso, las células blancas van al fondo no se rompen por la solución hipotónica, son resistentes a esta y en la parte superior queda la hemoglobina en suspensión alta es una solución roja; se lava varias veces para de esa manera deshacerse de los glóbulos rojos porque la hemoglobina es un inhibidor de técnicas debiología molecular, de las polimerasas.
En hueso, primero quitar toda la carne, todo el tejido blando (agua caliente, se lava)… someter a enzima que degrade todas las proteínas, que rompan los ácidos nucleicos que no interesan... (Condiciones climáticas y demás cambian la cantidad y calidad del DNA)…
Entonces se rompieron células rojas, deshacerse de hemoglobina, quedan las blancas que se debenromper, no con solución hipotónica; se utilizan soluciones con detergentes, como sds doisil sulfato de sodio, el más común o sulpanato?... se rompen membranas celular y nuclear, saliendo todo el contenido de la célula, se precipita eso, las proteínas básicamente, se utilizan soluciones salinas concentradísimas (hipocloruro de sodio 5 polar??); y en su___? 2 Quedan los ácidos nucleicos, y el ADN y ARNse separan, por ejemplo con un alcohol el isopropanol (Rna soluble, DNA no)… después se lava con etanol y queda precipitado el DNA listo para ensayo.
Ejemplo: Células epiteliales de boca (sirven para 1 o 2 ensayos), mientras sangre sirve para más, incluso se puede guardar (congelar, papel filtro, papel FTA). 1 lavarse la boca, con solución salina puede ser, se raspa para que se suelten células...
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