Herramientas De La Biología Celular

“HERRAMIENTAS DE LA BIOLOGIA CELULAR”
La biología celular emplea múltiples recursos para conocer a fondo el origen, la evolución y las propiedades de la célula. Estos recursos se usan cuando el producto de interés se encuentra en el interior de las células, son usados para lograr distinguir entre ellas y estudiarlas individualmente; algunos de los procedimientos son:
• Rotura de células ytejidos.
• Centrifugación.
• Cromatografía
• Electroforesis.
• Isoelectroenfoque.
• Uso del microscopio.

La purificación de una célula individual es una cuestión central para llevar a cabo el análisis biológico detallado de su estructura y función. No existe un único procedimiento para poder aislar los elementos.

 Rotura de células y tejidos. Se usan procesos mecánicos suaves, conocidoscomo homogenización para romper las membranas plasmáticas de las células y liberar el contenido celular. Entre algunos de los procedimientos, están éstos:

 Rompimiento de células mediante ultrasonidos. Las células son quebradas en una cavidad ultrasónica con desintegradores ultrasónicos, éstos son equipos usados para romper membranas celulares y disgregar aglomeraciones celulares. Utilizan ondasde presión de ultrasonido. La onda de presión de ultrasonido tiene una frecuencia de vibración superior a la capacidad auditiva del ser humano. Con la ultrasonificación se producen zonas de baja presión en el líquido, el líquido se transforma en gas formándose pequeñas burbujas, éstas colapsan debido a los cambios de presión y así se producen fuertes esfuerzos de corte en el líquido que rompen lascélulas.
 Uso de detergentes para abrir agujeros en la membrana plasmática. Ésta es una manera más suave de romper la membrana celular. Los detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e interrumpiendo la interacción lípido-lípido, lípido-proteína y proteína-proteína. Los detergentes, al igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se unen a superficies hidrofóbicas. Secomponen de una cabeza polar hidrofílica y una cola no polar hidrofóbica. . La elección del detergente para la rotura celular dependerá también del tipo de célula. Es importante tomar en cuenta además los buffer usados, el pH, la concentración de sal y la temperatura para la elección del detergente correcto.
 Forzar el paso de las células a través de un pequeño agujero mediante alta presión.Esto produce que se rompan por el esfuerzo de corte.
 Rompimiento de células con un émbolo rotatorio. Se usa un homogenizador potter que tiene un émbolo que encaja perfectamente en el tubo, la fuerza generada por el émbolo en el tubo hace que se rompan las células.
Aplicada cuidadosamente, la homogenización deja intactos la mayoría de los orgánulos. La espesa sopa resultante se llama homogenado oextracto celular, ésta contiene las moléculas grandes y pequeñas del citosol, como enzimas, ribosomas y metabolitos, así como todos los orgánulos delimitados por membranas.

 Centrifugación. En este método se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una centrifugadora, la cual imprime a la mezcla celular un movimiento rotatorio con una fuerza de mayor intensidad quela gravedad, provocando la sedimentación del sólido o de las partículas de mayor densidad. La centrifugación impone, gracias a la aceleración centrífuga, un efecto parecido al gravitacional, las partículas experimentan una aceleración que las obliga a sedimentar.


Cámara de centrifugación.


 Cromatografía. En este método se aplica una mezcla de proteínas en solución a la parte superior deuna columna cilíndrica, llena de una matriz sólida permeable inmersa en el solvente. A continuación, se bombea una gran cantidad de solvente a través de la columna. Las diferentes proteínas se van retrasando de manera distinta según sus interacciones con la matriz, por lo que pueden ser recogidas separadas a medida que son eluidas por el fondo de la columna. Según la matriz escogida, las...