hibridacion in situ



“Hibridación in Situ”
Histología
Unidad 1
Dra. Rosa Eréndira Sierra Puente


HIBRIDACIÓN IN SITU

Hibridación in situ es una técnica que detecta secuencias de ácidos nucleídos
encélulas, cromosomas o tejidos preservados.
La detección in situ provee una visualización directa de la localización
espacial de secuencias específicas que es crucial para dilucidar la
organización yfunción génica, por lo que el método de hibridación in situ se
ha convertido en una técnica importante en diversos campos, incluyendo
diagnóstico de rearreglos cromosomales, detección de infeccionesvirales y
análisis de la función génica durante el desarrollo embrionario.
La hibridación in situ toma como fundamento la complementaridad de los
ácidos nucléicos, la cual puede ser DNA y/o RNA, através de puentes de
hidrógeno formados entre las bases: adenina–timina (DNA) o uracilo (RNA) y
citosina-guanina (DNA y RNA).
Este apareamiento da lugar a una doble
cadena en la cual una cadena, tienela orientación opuesta a la otra con
respecto al esqueleto azúcar-fosfato. La secuencia es leída de 5' a 3'.


Secuencia
DNARNA
5'… TGATCCGTTA…3' 5'…UGAUCCGUUA…3'
3'… ACTAGGCAAT…5'
Transcripción



La técnicafue desarrollada en 1969 por Gall y Pardue e independientemente
por Jonh , en el mismo año Gall y colaboradores describieron una
técnica que formaba híbridos moleculares entre RNA y DNA. La técnicase
llevó a cabo en ovocitos de Xenopus laevis, hibridando rRNA con rDNA
extracromosomal. Detectaron la localización diferencial en las células, de los
híbridos de ácidos nucléicos ha distintosestadíos.

La técnica involucra:
a) Generación de ácidos nucleídos marcados para una detección
subsecuente.
b) Fijación de tejidos (seccionados), preparación de cromosomas.
c) Preparación del...