hola que ace

Páginas: 18 (4364 palabras) Publicado: 12 de mayo de 2014
Introducción
Alteración del metabolismo de la energía se prueba que es generalizada en las células cancerosas que se han aceptado como una característica emergente de cáncer [1] . Como se ha observado por primera vez por Otto Warburg, las células cancerosas se han elevado las tasas de consumo de glucosa y producción de lactato alta en presencia de oxígeno, conocido como glicolisis aerobia(Efecto Warburg) [2] . Alto consumo de glucosa se ​​utiliza clínicamente para diagnosticar y controlar la respuesta al tratamiento de los cánceres de la captación de imágenes de 2 - 18 F-desoxiglucosa con PET [3] . A pesar de sus aplicaciones clínicas de ancho, los mecanismos subyacentes el efecto Warburg siguen siendo en gran medida difícil de alcanzar. Las mutaciones de los componentes clave devarias vías de señalización y las enzimas metabólicas se han pensado para jugar un papel importante en la reprogramación metabólica del cáncer [4] , [5] .
Piruvato quinasa (PK) es una enzima limitante de la velocidad clave de la glucólisis que cataliza el último paso de la glucólisis. Convierte fosfoenolpiruvato (PEP) en piruvato, mientras que la fosforilación de ADP en ATP. Hay cuatro isoformas depiruvato quinasa, incluyendo PKL, PLR, PKM1 y PKM2 [6] . Durante la tumorigénesis, la expresión específica de tejido PKM1/L/R disminuye gradualmente y se sustituye por la expresión PKM2. PKM2 es altamente expresado en casi todas las células del cáncer [7] . Se considera como un regulador clave de efecto Warburg. PKM2 también funciona como un co-activador transcripcional o una proteína quinasa pararegular la tumorigénesis [8] - [10] . Sin embargo, los mecanismos moleculares que subyacen a la regulación de PKM2 es necesario aclarar aún más.
Las proteínas de choque térmico (HSP) son hasta reguladas-mientras que las células se exponen a temperaturas elevadas oa la falta de oxígeno [11] . Los miembros de esta familia se han conservado durante la evolución. Son indispensables para la traducciónde proteínas, plegar, desplegar, translocación, y la degradación [12] . Ellos están involucrados en el metabolismo celular, el ciclo celular y otros [13] . Estudios previos muestran que los miembros de HSP están implicados en la tumorigénesis, incluyendo supresores tumorales HLJ1 (DNAJB4), Tid1 (DNAJA3), DNAJC25, factor de HDJ2 radiorresistencia (DNAJA1) y otros miembros relacionados con el tumor,como DNAJB6, DNAJC12, DNAJC1, DNAJC12, DNAJC15 [14] - [17] . Los estudios de diagnóstico de HSP y tratamiento en el cáncer sugieren que son nuevas dianas terapéuticas [18] , [19] .
Teniendo en cuenta el papel fundamental de la PKM2 en la tumorigénesis, este estudio fue dirigido a comprender los mecanismos subyacentes de la regulación de PKM2. En nuestro estudio, HSP40 se encontró asociado conPKM2 a través del cribado de dos híbridos de levadura. Nuestros resultados indican que la asociación HSP40-PKM2 estaba relacionado con la actividad de la piruvato quinasa y la expresión génica glucolítica PKM2 mediada. Nuestros resultados proporcionan nueva información sobre el mecanismo subyacente de la regulación PKM2 por HSP40, que se correlacionaban con retroceso de crecimiento de las célulasdel cáncer a través de la reprogramación metabólica de la glucosa.
Materiales y Métodos
Levadura de dos híbridos de cribado
La larga duración, una N-terminal (1-354aa) y dos porciones C-terminal (354-531aa, 406-531aa) de PKM2 humana se clonaron en el vector de expresión de levadura pGBKT7 (Clontech). Estas construcciones se utilizaron como cebos para el cribado de la biblioteca de ADNc de riñónhumano (N º de catálogo 638816, Clontech). La selección de los candidatos de proteínas que interactúan por dos híbridos de levadura se realizó de acuerdo a las instrucciones del fabricante (Clontech).
Cultivo de células y transfección
Todas las líneas celulares incluyendo HEK293T, HeLa, A549, HepG2 se cultivaron en DMEM (GIBCO) suplementado con 10% de FBS (Gibco) a 37 ° C en una atmósfera...
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