Identificacion de ratones knock out

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UNIVERSIDAD CETROOCCIDENTAL
LISANDRO ALVARADO
DECANATO DE CIENCIAS VETRINARIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS SOCIALES Y ECONOMICAS
NUCLEO TARABANA

IDENTIFICACION DE RATONES KNOCK OUT DEFICIENTES EN PLASMINOGENO, EN EL BIOTERIO CENTRAL DE LA UCLA

Br. Adriani Villarreal, Marisela
C.I. 15.825.681
Proyecto de Investigación II.
5ª Año

Noviembre, 2006.

INDICEPgn

INTRODUCCION……………………………………………3

MATERIALES Y METODOS……………………………….4

RESULTADOS ………………………………………………5

DISCUSIÓN……………………………………………….….5

CONCLUSION Y RECOMENDACIONES…………………5

BIBLIOGRAFIA……………………………………………….6

INTRODUCCION

En los últimos años se han utilizado para la investigación un gran nù-
mero de animales en el laboratorio, entre loscuales la especie mas utilizada
es el raton (Mus musculus), gracias a su tamaño, su facil manejo y rapida reproducción. Desde 1980, fecha en la cual se obtienen los primeros ratones trangenicos por microinyección, y mas tarde en 1987, cuando Thomas y Capecchi obtienen los primeros ratones knock out por precombinación homologa (www.prodiversitas.biotica.org. 2003). Un ratón knock out es aquel animalcuyo genotipo fue modificado por la escisión de una secuencia de DNA, la cual es transmitida a su descendencia, a través de las leyes de la herencia.

El plasminógeno es una glicoproteína mono catenaria compuesta por 790 aminoácidos y 24 puentes disulfuro, sintetizándose en el hígado, el gen que codifica esta proteína se encuentra en el cromosoma 17 murino, la principal función esla regulación de la coagulación y degradación de los coágulos de fibrina. Al faltarles a estos animales la posibilidad de regular este sistema, nos permite ampliar los conocimientos sobre las enfermedades relacionadas con esta glicoproteína.

En el Bioterio Central de la UCLA se encuentra una población reducida de esta cepa de ratones knock out carentes de plasminógeno, el problemaprincipal es que para identificarlos se tiene que realizar; a través de técnicas moleculares especificas, ya que esta no es una característica que se pueda observar a simple vista. Al seleccionar las parejas se debe tomar en cuenta cuales son los animales (-/-) y (+/-), para realizar los cruces respectivos y así de esta manera mantener la cepa, ya que se dispone de muy pocas unidades animales que sepuedan utilizar para aumentar la población.

Hoy en día gracias a los avances tecnológicos, se puede realizar una serie de técnicas para escoger los individuos a utilizar. La Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR) es una técnica basada en la catalizacion y expresión de cebadores utilizando DNA polimerasa termostable, los cebadores se encargan de encontrar la secuencia de DNAnegativo, lo cual nos permitirá identificar los individuos portadores de la carencia y que serán utilizados para la reproducción. Por esta razón los objetivos de esta investigación son; objetivo general: Identificación de los ratones knock out deficientes en plasminógeno, y como objetivos específicos: a) Determinación del genotipo parcial plg a partir de DNA extraído de muestras de tejidote sangremurina, b) Presentar los individuos carentes de plasminógeno para su reproducción y c) Motivar la reproducción de esta cepa para estudios futuros.

MATERIALES Y METODOS

El presente trabajo se llevo a cabo en el Bioterio Central de la UCLA y en el Laboratorio de Investigación Biológica y Molecular de la UCLA; en el Bioterio se tomaron muestra de tejido( punta de la cola y partede una oreja) a 12 ratones de la cepa carente de plasminógeno de los cuales eran 8 hembras y 4 machos el día 14-09-2006, luego el tejido fue enviado al laboratorio para su respectiva evaluacion manteniéndolas en congelación.

En el laboratorio, se realizo la técnica de PCR a las muestras obtenidas de los 12 ratones, usando como control negativo H2O; se utilizo un estuche comercial...
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