Identificación de aminoácidos por aminoacidos

IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFÍA
Laboratorio #4

















Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia








IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS POR CROMATOGRAFÍA
En esta cuarta práctica de laboratorio realizaremos la identificación de diferentes aminoácidos por medio de la cromatografía en especial la de papel por la cual podemos diferenciarpor medio de una coloración, que esta genera en el papel. Los diferentes colores que corresponden a cada uno de los aminoácidos (Prolina, ácido Glutámico, lisina) que manejaremos en esta práctica, para observar el comportamiento en la cromatografía. Para así poder establecer una relación entre los principios teóricos y los hechos experimentales, lo cual nos permitirá desarrollar habilidades yconocimientos en este campo y poder emplearlo en la solución de problemas de nuestra vida diaria.
INTRODUCCION
La cromatografía es una técnica de separación basada en el principio de retención selectiva, que permite separar los distintos componentes de una mezcla facilitando su identificación y cuantificación. El nombre de la técnica se debe al botánico ruso Mikhail Semenovich Tswett, quien usócolumnas de vidrio rellenas de carbonato de calcio para separar pigmentos vegetales.
Las técnicas cromatográficas son muy variadas, sin embargo, en todas el fenómeno de separación ocurre al hacer pasar una fase móvil fluida (gas, líquido o fluido supercrítico), que arrastra a la mezcla, a través de una fase estacionaria constituida por un sólido finamente dividido o un líquido fijado en un sólido. Eneste proceso los componentes de la mezcla interaccionan de diversa manera con la fase estacionaria y debido a esto atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades, por lo cual se van separando.
De acuerdo a cómo esté dispuesta la fase estacionaria las técnicas cromatográficas se pueden dividir en:
1. Cromatografía plana:
La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre unpapel. Las principales técnicas son:
• Cromatografía en papel
• Cromatografía en capa fina
2. Cromatografía en columna:
La fase estacionaria se sitúa dentro de un tubo o columna. Según el tipo de fluido empleado como fase móvil se distinguen:
• Cromatografía de líquidos
• Cromatografía de gases
• Cromatografía de fluidos supercríticos
La cromatografía en papel es un proceso muyutilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta técnica la fase estacionaria está constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego eldisolvente o mezcla de disolventes empleada como fase móvil (eluente o eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un recipiente que la contiene (cámara de desarrollo). Después de unos minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel, se retira el papel y seca. Es importante que lacámara de desarrollo permanezca bien tapada durante el proceso de ascenso capilar de la fase móvil (desarrollo cromatográfico), pues de lo contrario no se alcanza el equilibrio necesario entre el líquido (fase móvil) y el vapor del líquido. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se deberán ver manchas de distinto color separadas a lo largo del papel. Cuando loscomponentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de revelado.
La cromatografía es un sistema de separación dinámica, porque continuamente se producen equilibrios entre los componentes de la mezcla a separar y las fases móvil y estacionaria. El proceso de separación se produce a causa de las interacciones entre los componentes de la mezcla con la fase móvil y la fase estacionaria;...