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Sistema IMViC

Corresponde a un conjunto de 4 pruebas bioquímicas: Indol, Rojo de Metilo, Voges Proskauer y Citrato. Estas pruebas se usan para diferenciar bacterias entéricas, las cuales pueden ser usados como indicadores biológicos de contaminación fecal en agua y alimentos.
Prueba de Indol
Fundamento:
El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente dela tripteína, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac´s, para originar un compuesto de color rojo o rosa.
Ingredientes
Medio SIM (Incubar 24 h a 35°C)
Fórmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
Tripteína | 20.0 | Suspender 30 gdel polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemólisis y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Solidificar en posición vertical. |
Peptona | 6.1 | |
Sulfato de hierro y amonio | 0.2 | |
Tiosulfato de sodio | 0.2 | |
Agar | 3.5 | |
pH final: 7.3 ± 0.2 |

Reactivos.
*Reactivo de Kovacs
 
Ingredientes: |   |
p-imetilaminobenzaldehído | 5 g |
Alcohol amílico (normal) | 75 mL |
HCI concentrado | 25 mL |
 
1. Disolver el p-Dimetilaminobenzaldehído en alcohol amílico normal.
2. Adicionar lentamente el HCl. Almacenar a 4°C.

Para la prueba de indol
1. Adicionar 0,2-0,3 mL del reactivo a 5 mL del cultivo de bacteria en caldo triptona.

Resultados.Positivo: Anillo de color rosa o rojo.
Negativo: Anillo amarillo.
Prueba de Rojo de metilo
Fundamento:
Esta prueba detecta si el microorganismo es capaz de producir y mantener estables los derivados ácidos de la fermentación ácido mixta de la glucosa. Las bacterias rojo metilo (+) producen ácidos estables, es decir, que no continúan siendo degradados a otros productos. En consecuencia el mediose mantiene ácido. Por el contrario, en las bacterias rojo metilo (-), los ácidos formados durante a fermentación ácido mixta de la glucosa continúan siendo degradados a carbonatos y CO2, por ello la acidez del medio no se mantiene.
El medio usado en esta prueba es un caldo suplementado con glucosa (MR-VP Medio). En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para eldesarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. Después de 24 a 48 h, se agregan unas gotas de rojo metilo. Si el indicador detecta ácidos, mantiene su color rojo, lo cual indica un resultado positivo. Por el contrario si el indicador vira a amarillo, significa un resultado rojo metilo (-).
Ingredientes
MR-VP Medio (Incubar 72 h a 35°C)

Fórmula (en gramos por litro) |Instrucciones |
Pluripeptona | 7.0 | Suspender 17 g del polvo por litro de agua destilada. Calentar suavemente agitando hasta disolver. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos. |
Glucosa | 5.0 | |
Fosfato dipotásico | 5.0 | |
pH final: 6.9 ± 0.2 |

Reactivos
* Indicador rojo de metilo (R44)

Solución A |   |
Ingredientes | |
Cristal violeta(colorante 90%) | 2 g |
Etanol 95% | 20 mL |
 

Solución B | |
Ingredientes: |   |
Oxalato de amonio | 0,8 g |
Agua destilada | 80 mL |

1. Mezclar la solución A y B. Almacenar por 24 horas
2. Filtrar a través de un papel filtro áspero.

Resultados:
Positivo: Color rojo.
Negativo: Color amarillo.
Prueba de Voges Proskauer
Fundamneto:
Esta prueba detecta si el microorganismo escapaz de realizar la fermentación butanodiólica de la glucosa. Las bacterias pueden usar varias vías fermentativas según el sistema enzimático que cada una posea. Una de estas fermentaciones es la bitanodiólica, llamada así porque esta genera como producto final bitanodiol. La acetoína es un producto intermediario de esta vía, precursor del butanodiol. Cuando la acetína reacciona con alfa naftol...
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