INFORME BACTERIAS FERMENTATIVAS

ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE FISIOLOGÍA MICROBIANA
AISLAMIENTO DE BACTERIAS FERMENTATIVAS: RUTAS DE PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS MIXTOS Y DE 2,3-BUTANODIOL
KELLY J. SANTOS MANCILLA
C.C. 1140849623
1. FLUJOGRAMA2. OBJETIVOS
Utilizar un esquema tradicional para aislar microorganismos fermentadores de la familia Enterobacteriaceae a partir de una muestra de suelo.
Evaluar el microorganismo y establecer una posible ruta metabólica.
Crear destreza en varias técnicas usadas con frecuencia en el laboratorio de Microbiología.
Entender el fundamento de algunas de las pruebas bioquímicasutilizadas para la caracterización de microorganismos

3. RESULTADOS

MacConkey
Colonias de microorganismos fermentadores de lactosa.
Tinción de Gram

Colonia 1: Al Gram se observan bacilos gram negativos.
Colonia 2: Al Gram se observan bacilos gram negativos.
Prueba de Oxidasa

Colonia 1: Oxidasa negativo.
Colonia 2: Oxidasa negativo.
Agar OF Glucosa
C1: Microorganismo fermentador, móvil.
C1’:Microorganismo fermentador, móvil.
C2: Microorganismo fermentador y productor de gas, móvil.
C2’: Microorganismo fermentador, móvil.

Prueba de Rojo de Metilo

Colonia 1 Colonia 2
Colonia 1: Positiva para rojo de metilo.
Colonia 2: Positiva para rojo de metilo.
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Luego de hacer lasiembra en el agar MacConkey y dejar incubar, pudimos observar la presencia de colonias rosadas, ya que debido a la fermentación de la lactosa se produce un viraje del color del indicador (rojo neutro) que contiene el medio de cultivo diferencial. El medio de cultivo es además selectivo ya que contiene una mezcla de sales biliares y de cristal violeta que inhiben el crecimiento de gran parte debacterias Gram positivas y permite el crecimiento de bacterias Gram negativas entre las que se encuentran toda la familia de Enterobacteriaceae (1), es necesario de igual manera hacer una comprobación mediante una tinción de Gram. Para hacerla se seleccionaron cuatro colonias que hayan sido lactosa positivas y se sembraron en agar nutritivo, con el fin de obtener cultivos axénicos y diferentesmicroorganismos para realizarles las pruebas.

Posteriormente se procedió a hacer la tinción de Gram para así verificar que se trataran de bacilos Gram negativos. Como sabemos la tinción de Gram permite diferenciar un grupo de bacterias del otro, debido a la diferencia en las paredes celulares de los mismos; ya que las bacterias Gram positivas tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, en cambiolas Gram negativas tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacárida externa. Tras la tinción con cristal violeta y la adición de lugol se realiza un lavado con alcohol acetona que arrastrará el colorante en las Gram negativas (debido a la estructura de su pared), y al agregar el colorante de contraste safranina quedarán de color rosado (2). La comprobación de la morfología delas bacterias y la coloración rosada de nuestro interés, además de la verificación que no se tratara de un cultivo mixto, se realizó mediante la observación de las placas en el objetivo de 100x de un microscopio.
Sólo se seleccionan dos colonias de las cuatro que se sembraron con anterioridad, que cumplieron con los requerimientos para continuar con las pruebas. A estas dos colonias de bacilosGram negativos se les realizó la prueba de oxidasa. Al realizar la prueba de oxidasa se buscaba que el resultado fuera oxidasa negativo (como ocurrió), la prueba en realidad determina la presencia del citocromo c y el resultado es positivo sólo en las bacterias que contienen el citocromo c como una enzima respiratoria. El resultado negativo para las dos colonias estudiadas indica que no...