Infrarrojo

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Técnicas Analíticas Instrumentales

Trabajo Práctico Nº2
Conocimientos necesarios para realizar el TP: Espectro electromagnético. Espectros de emisión fluorescente en el rango UV-VIS.
Nota: Las indicaciones sobre el manejo de los espectrómetros se proporcionarán durante la clase

Objetivos
Conocer el manejo del Espectrómetro IRAffinity-1 Compact Fourier Transform Infrared Shimadzu.Obtener el espectro infrarrojo de distintos compuestos orgánicos.
Conocer el manejo del Nanodrop 3300, Fluorescencia.
Comparar las técnicas de fluorescencia con otras técnicas en la determinación analítica de concentraciones.

Primera Parte.

Obtención de espectro Infrarrojo de compuestos orgánicos

Fundamento de la técnica
La espectroscopia de infrarrojo se puede aplicar al análisiscualitativo y cuantitativo en todos los ámbitos de la investigación. Este éxito se basa en la alta velocidad de adquisición de datos, el ser una técnica no invasiva (investigación biológica), y la ausencia de la necesidad de marcado o tinción. Un espectro infrarrojo se puede considerar como una huella digital, lo que permite su uso para la identificación rápida de compuestos a través de la comparaciónde su espectro en una búsqueda de bibliotecas espectrales o análisis de picos. Debido a la complejidad de las muestras (por ejemplo biológicas), el análisis cuantitativo en la actualidad se lleva a cabo principalmente a través de métodos informáticos. En estas aplicaciones, los espectros se utilizan tal como son adquiridos y luego con ayuda de un software adecuado se identifican aquellos picosque permiten caracterizar el compuesto.
En este trabajo se procederá a la identificación/caracterización de espectros de compuestos orgánicos aromáticos sencillos a través de su análisis manual o tradicional.

Procedimiento: Obtener el espectro de absorción de los siguientes compuestos orgánicos: benceno, anilina, fenol, tolueno, naftaleno
1. Colocar la solución en el accesorio apropiado,ubicarla en el espectrofotómetro IR y obtener el espectro en la zona de 650 – 4000 cm-1.
2. Diluir la solución anterior al medio y obtener el espectro. Compararlo con el obtenido en el punto 1.
3. Marcar los picos de máxima absorción.
4. Comparar los espectros de los distintos compuestos: observar los máximos de absorción, sacar conclusiones respecto de los distintos grupos funcionales presentes ypicos observados.
5. Realizar un blanco con etanol absoluto que luego se restará a los demás espectros.

Análisis de datos
• Relacionar picos observados con grupos funcionales presentes en cada molécula.
• Comparar la potencialidad de esta técnica en la elucidación de estructuras y naturaleza de compuestos respecto a la utilizada en el TP Nº 1.

Referencias
The Handbook of Infraredand Raman Characteristic Frequencies of Organic Molecules, Lin-Vien, D.; Colthup, N.B.; Fateley, W.G.; Grasselli, J.G. 1st ed.; Academic Press: San Diego, 1991.
http://orgchem.colorado.edu/hndbksupport/irtutor/tutorial.html

Segunda Parte

Determinación de concentración de nitritos a través de
Espectroscopia de fluorescencia

Fundamento de la técnica
[pic]

Aunque la reacción de Griesses un ensayo sencillo, rápido y de bajo costo, en los fluidos fisiológicos, tiene un límite de sensibilidad práctica sólo 3.2 mM. Para aumentar la sensibilidad de la medida de NO, diferentes métodos fluorométricos se han desarrollado que aprovechan de la capacidad de NO para producir agentes N-nitrosantes. Uno de estos métodos empleados es el uso del compuesto aromático 2,3-diaminonaphthalene (DAN)como indicador de la presencia de NO. El DAN relativamente no fluorescente reacciona rápidamente con NO-derivados (N2O3) generados a partir de la interacción del NO con el oxígeno o con ácido nitroso formado a partir de nitritos para dar el producto altamente fluorescente 2,3-naphthotriazole (NAT, ver Fig). Este método ofrece las ventajas adicionales de la especificidad, sensibilidad y...
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