Ingenieria

Métodos enzimaticos de análisis.

Fue introducido en la década de los 70 por Bar-Akiva y otros autores como arma analítica para la determinación de la fracción «biológicamente activa» demicronutrientes. Como se indicó, consiste en determinar el nivel de un enzima que soporta en su estructura el elemento a evaluar, del que específicamente depende para la expresión de su actividad deduciendoel estado nutritivo de la planta en dicho elemento por comparación con una actividad considerada normal. De esta definición se desprenden varias características que el análisis enzimático debecontemplar.

En primer lugar, el elemento a analizar debe encontrarse estructuralmente ligado a la proteína enzimática, de forma que no haya pérdida del mismo durante la preparación de la muestra y en elpropio análisis. Esto sólo lo cumplen los metaloenzimas, y no todos, no siendo válidos los complejos metal-proteína ni aquellos enzimas dependientes de grupos prostéticos metálicos debidamente ligados ala mitad proteica. En segundo lugar, el enzima debe ser activo sólo con el elemento en cuestión, es decir, que éste no pueda funcionalmente ser sustituido por ningún otro. Por lo antes visto, estacircunstancia no acostumbran a cumplirla los complejos metalproteína, y ni siquiera todos los metaloenzimas. Finalmente, deben conocerse los niveles normales de actividad del enzima seleccionado, enmuchos aspectos fluctuantes por depender de una serie de factores: especie y variedad de la planta, edad de la misma, ontogenia de la hoja, junto a otros metodológicos que habrán de ser precisamentedefinidos. Así, pues, la estandardización del método habrá de ir precedida de un estudio sobre las variaciones de la actividad enzimática durante el ciclo evolutivo del vegetal, debiéndose precisar eltiempo del muestreo y la posición del material foliar recolectado.

Para obviar algunos de estos problemas se hace, frecuentemente, uso del fenómeno de «inducción enzimática». Si el nivel de un...