Ingeniero en bioquimica

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA
INGENIERÍA BIOQUÍMICA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

PRÁCTICA No. 2
"TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE CULTIVOS PUROS”

INTRODUCCIÓN
Los microorganismos deben ser cultivados en medios de cultivo adecuados para
caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar sus actividades
metabólicas.
Sembrar o inocular es introducirartificialmente una porción de muestra (inoculo) en un
medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego de sembrado, el medio
de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando asa
bacteriológica (el filamento termina en aro o de punta, según el caso), hisopo o pipeta
estéril.
Cultivoen medio líquido. Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El
crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o
por sedimento.
Cultivo en medio sólido puede ser en placa o tubo. Cuando es en placa, la siembra
puede ser en superficie o vertido en placa (incorporada).El medio de cultivo en tubo
puede ser inclinado o sin inclinar. El asa que se usa enel primer caso, su extremo
termina en un aro y en el segundo, termina en punta, para sembrar por picadura.
Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio
puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar,
se extiende dando un crecimiento confluente.
En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lotanto la siembra
en placa se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para
contar y aislar.
Cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado,
generalmente es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estéril.
AISLAMIENTO
Aislar es separar un tipo de microorganismo a partir de una población polimicrobiana.
Por lo tanto,es necesario hacer algún procedimiento de aislamiento para separar e
identificar los distintos tipos de microorganismos presentes.
El aislamiento se puede lograr directamente a partir de una muestra cuando el o los
microorganismos están en una proporción adecuada.
Cuando el microorganismo que se desea aislar e identificar se encuentra en baja
proporción en la muestra, o interesa un solo tipode microorganismo, se lleva a cabo un
procedimiento llamado búsqueda, que involucra una primera etapa de aumento del
número de microorganismos del tipo que se desea aislar en relación al resto de la
población. Luego se aísla por el método de estrías o por dilución y se identifica.

Para aislar, se realizan los siguientes procedimientos:
a) Aislamiento por estrías
Consiste en cargar el asacon la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte
de la superficie de la placa; se quema el asa, se enfría, se gira la placa 90º y se vuelve a
estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de
placa. Por último, sin quemar el asa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.

b) Aislamiento por dilución
Se emplean tanto el método de siembraincorporada como siembra en superficie.
Suele ser necesario diluir la muestra. Para ello se puede preparar las diluciones
decimales en condiciones asépticas usando suero fisiológico o algún otro diluyente o con
el asa, esta técnica se hace en forma cualitativa o cuantitativa.
La siembra incorporada se realiza colocando 1 mL de la muestra en el centro de la
caja y se le agrega el medio decultivo, mezclando con cuidado con movimientos
rotatorios. También se pueden preparar las diluciones directamente en tubos de agar
fundido y termostatizado (20 mL) se agita por rotación entre las manos y se vierte en
placas de Petri estériles.

OBJETIVO:
Al finalizar el trabajo práctico el estudiante tendrá la capacidad y destreza de ejecutar
las técnicas básicas de siembra y aislamiento de...