inmunoelectrforesis

Universidad Autónoma de Sinaloa

Facultad de Ciencias Químico-Biológicas

Inmunología Aplicada

Tema: Inmunofluoresis

Maestro: Q.F.B. José Alberto Piña Ibarra

Alumna: Rivas Calderón Reyna Enith
Grupo: 4-2



Agosto, 2012.

Introducción
La inmunoelectroforesis es el nombre genérico que recibenun amplio número de métodos bioquímicos para la separación y caracterización de proteínas basadas en la electroforesis y la reacción con anticuerpos. Todas las variantes de la inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas, anticuerpos que van a reaccionar con las proteínas que se desea separar o caracterizar. Los métodos fueron desarrollados y usados ampliamente durante la segunda mitad del SigloXX.
Técnica de inmunoelectroforesis
La inmunoelectroforesis es una técnica que se realiza en dos fases. Primero se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el antígeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo específico colocado en un pocillo lateral. Por difusión llegan a encontrarse los antígenos y el antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible enforma de líneas de precipitación que pueden ser estudiadas por comparación con un sistema estándar.
En Inmunología clínica, esta técnica puede utilizarse en la identificación de las proteínas de mieloma.

Procedimiento
Se suele utilizar un gel de agarosa al 1% con un grosor cercano al milímetro, y un pH en torno al 8,6. Esto sirve tanto para la electroforesis como para la reacción con losanticuerpos. Se prefiere la agarosa como matriz de soporte porque tiene un tamaño de poro mayor que otros medios, que permiten el libre paso y separación de las proteínas, pero en cambio es lo suficientemente estrecho como para impedir el paso de los complejos antígeno-anticuerpo. El elevado pH se utiliza porque, en esas condiciones, los anticuerpos son prácticamente inmóviles. Se suele emplearuna bañera de electroforesis de tipo horizontal.
Los complejos de inmunoprecipitación se pueden ver en el mismo gel de agarosa, pero requieren ser teñidos con colorantes para proteínas tales como el Azul Coomassie. En contraste con la electroforesis en gel SDS, la electroforesis en gel de argarosa permite que las proteínas estén en forma nativa (estructura cuaternaria), por lo que lainmunoelectroforesis permite la caracterización de la actividad enzimática y la unión a ligandos además de la separación electroforética.



Tipos
En orden de aparición, los métodos inmunoelectroforéticos fueron:
Análisis inmunoelectroforético (Inmunoelectroforesis de una dimensión)
Inmunoelectroforesis cruzada (Inmunoelectroforesis cuantitativa en dos dimensiones)
Inmunoelectroforesis en cohete(Inmunoelectroforesis cuantitativa de una dimensión)
Contrainmunoelectroforesis
Inmunoelectroforesis de afinidad

El Análisis inmunoelectroforético es el mas clásico de los ensayos. Se fundamenta en la separación de las proteínas por electroforesis, tras la que se aplica, sobre el gel de agarosa, el suero de anticuerpos sobre las proteínas ya separadas, tras lo que se forma un precipitado trasun período adecuado de difusión, para permitir que las proteínas se encuentren con sus anticuerpos específicos. La introducción de este ensayo conllevó un gran avance de la química de las proteínas, y muchos de los descubrimientos de proteínas en líquidos y extractos biológicos se realizaron por este método: permitió caracterizar un gran número de proteínas en suero y además se pudo establecer laexistencia de distintas clases de inmunoglobulinas y sus diferentes características electroforéticas.
La inmunoelectroforesis cruzada, también llamada Inmunoelectroforesis cuantitativa de dos dimensiones, difiere del método anterior en el hecho de que las proteínas, tras su electroforesis inicial, no se incuba con anticuerpos. En su lugar, se vuelven a someter a una segunda electroforesis, esta...