Inmunoelectrofloresis

INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es el nombre genérico que reciben un amplio número de métodos bioquímicos para la separación y caracterización de proteínas basadas en la electroforesisy la reacción con anticuerpos. Todas las variantes de la inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas, anticuerpos que van a reaccionar con las proteínas que se desea separar o caracterizar. Losmétodos fueron desarrollados y usados ampliamente durante la segunda mitad del Siglo XX.
Procedimiento
Se suele utilizar un gel de agarosa al 1% con un grosor cercano al milímetro, y un pH en torno al8,6. Esto sirve tanto para la electroforesis como para la reacción con los anticuerpos. Se prefiere la agarosa como matriz de soporte porque tiene un tamaño de poro mayor que otros medios, quepermiten el libre paso y separación de las proteínas, pero en cambio es lo suficientemente estrecho como para impedir el paso de los complejos antígeno-anticuerpo. El elevado pH se utiliza porque, en esascondiciones, los anticuerpos son prácticamente inmóviles. Se suele emplear una bañera de electroforesis de tipo horizontal.
Los complejos de inmunoprecipitación se pueden ver en el mismo gel deagarosa, pero requieren ser teñidos con colorantes para proteínas tales como el Azul Coomassie. En contraste con la electroforesis en gel SDS, la electroforesis en gel de argarosa permite que las proteínasestén en forma nativa (estructura cuaternaria), por lo que la inmunoelectroforesis permite la caracterización de la actividad enzimática y la unión a ligandos además de la separación electroforética.Tipos
En orden de aparición, los métodos inmunoelectroforéticos fueron:
• Análisis inmunoelectroforético (Inmunoelectroforesis de una dimensión)
• Inmunoelectroforesis cruzada (Inmunoelectroforesiscuantitativa en dos dimensiones)
• Inmunoelectroforesis en cohete (Inmunoelectroforesis cuantitativa de una dimensión)
• Contrainmunoelectroforesis
• Inmunoelectroforesis de afinidad
El...