jhonnal

Electro-expre LJC

L.E Chica1
J.C Tamayo2
J.F Cardona3
1. Estudiante Ingeniería Biomédica, Yuliana Gallo.
2. Estudiante Ingeniería Biomédica, Yuliana Gallo.
3. Estudiante Ingeniería Biomédica, Yuliana Gallo.

Resumen
Con este artículo se pretende dar a conocer los métodos y resultados de la investigación
en prácticas de laboratorio, realizadas por estudiantes del ITM (institutotecnológico
metropolitano), durante las cuales se realizaron mediante expresión génica, electroforesis
y cuantificación de proteínas. La extracción de ADN se obtuvo de una muestra de sangre
donada por una de las participantes de la investigación, este procedimiento se llevó a
cabo en el laboratorio de ingeniería biomédica, en el campus robledo del ITM; los
resultados arrojados en estas prácticassalieron satisfactoriamente y fueron bien
aceptados por la docente a cargo del grupo ya que los pasos se siguieron de una manera
correcta.
Durante la práctica se realizó el rompimiento de la estructura del ADN con la proteinasa K,
que es la encargada de hacerlo, posteriormente se le adiciona la RNasa A que cataliza la
hidrólisis de ARN en componentes más pequeños. Pueden dividirse enendonucleasas y
exonucleasas, que junto con el buffer se obtiene una solución homogénea, después de
esto y adicionando otros componentes se procede a realizar la electroforesis
correspondiente.

1. Introducción
La expresión génica es la técnica que
utilizan normalmente los científicos para
encontrar inconsistencia dentro de la
sangre, esta técnica emplea métodos
como desnaturalización de ADN y elrompimiento de su estructura con los
cual se busca tener sangre total, donde
se hace un lavado minucioso para
purificarla y botar todo aquello que no
nos sirve; después de esto se lleva a una

conservación de baja temperatura donde
se deja reposar para evitar el contacto
con el ambiente y una posible causa de
contaminación , lo que se busca con esto
es hacer la electroforesis que nosayudará a mostrar el resultado pertinente
si se hizo de manera correcta cada uno
de los pasos. La electroforesis se hace
de manera manual con cada uno de los
instrumentos o herramientas asignados
en donde cuidadosamente se empieza

por medir aproximadamente 20 micro
gramos de proteinasa K en la balanza
correctamente tarareada, una vez
tarareada se procede agregar 20 micro
litros desangre y si se hizo bien cada
paso esta pasa a tener una contextura
homogénea.
Finalizada
la
electroforesis mandamos a secuenciar el
segmento de ADN de donde queremos
saber la proteína específica, realizando
la
espectrofotometría
de
masas

2) Metodología

Una vez la muestra esté disponible en el
laboratorio, realice los siguientes pasos:

2.1) Extracción de ADN
Antes de iniciar elprocedimiento tenga
en cuenta lo siguiente
a)
Identifique
los
guardianes
o
recipientes con la bolsa roja que utilizara
para desechar el material de plástico
contaminado, y los frascos de vidrio
debidamente marcados
b) Para descartar los reactivos del kit.
c) Utilice bata, guantes, gafas y
tapabocas para manipular los reactivos
del kit y el ADN(Este ácido nucleico es
sensible al DNasapresentes en la saliva,
la piel y las superficies).

Rompimiento
(Homogenizado)

de

estructuras

1. Adicione 20 microlitros (20µl) de
proteinasa K en el microtubo estéril de
1.5 ml previamente marcado (deseche la
punta de la micropipeta en bolsa roja)
2. Adicione 200 micro litros de la muestra
de sangre. Una vez deposite la muestra
mezcle 10 veces la solución. Una vez
termine dehomogenizar, descarte la
punta de la micropipeta en el guardián
designado.
3. Adicione 20 µl de RNasa A.

d) Encienda el baño serológico o el
bloque seco y póngalo a 55°C.

4. Mezcle la solución de manera
vigorosa, colocando el microtubo en el
vortex durante 10 segundos.

e) Limpie la superficie de trabajo con
hipoclorito y alcohol antiséptico (70%).

5. Incube la solución a...