Kunitz

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  • Publicado : 13 de octubre de 2010
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INTRODUCCION:
Las proteasas, se encuentran naturalmente en organismos vivos, donde se usan para la digestión molecular y la reducción de proteínas no deseadas. Estas pueden romper ya sea enlacespeptídicos específicos, dependiendo en la secuencia de aminoácidos de la proteína, o pueden reducir un péptido completo a aminoácidos. Del mismo modo, catalizan procesos reversibles de hidrólisis dediferentes sustratos.
Uno de los métodos mas utilizados es la determinación de la actividad de las enzimas proteolíticas es el de Kunitz, que se basa en medir la cantidad de péptidos y aminoácidossolubles liberados durante la hidrólisis aprovechando la capacidad de alguno de ellos, de absorber selectivamente a 280 nm.
OBJETIVOS:
* Elaborar una curva estándar de actividad enzimática.
*Determinar actividad proteolítica de lo bromelaína, papaína y otras proteasas.
RESULTADOS:
Tabla 1: Actividad enzimática de la Tripsina.

Tubo No. | Concentración de Tripsina (mg/ml) | A280 | A280Corregida |
| | Problema | Testigo | |
T1 y 1 | 0.04 | 0.345 | 0.055 | 0.274 |
T2 y 2 | 0.08 | 0.546 | 0.046 | 0.500 |
T3 y 3 | 0.12 | 0.715 | 0.049 | 0.666 |
T4 y 4 | 0.16 | 0.805 | 0.052| 0.753 |
T5 y 5 | 0.20 | 0.943 | 0.051 | 0.892 |
Problemas |
TI y I | Bromelaína 1:10 | 0.859 | 0.204 | 0.655 |
TII y II | Bromelaína 1:20 | 0.905 | 0.201 | 0.700 |
TIII y III | Papaína |0.445 | 0.096 | 0.349 |

Tabla 2:Cuva de actividad enzimática especifica para al digestion de caseína por tripsina.

Tubo No: | Unidades Tripticas | A280 corregida |
1 | 0.000524 | 0.274 |
2| 0.001048 | 0.500 |
3 | 0.001572 | 0.666 |
4 | 0.002096 | 0.753 |
5 | 0.00262 | 0.892 |
Calculos:


Entonces para calcular UT tenemos que:
0.0131 -------- 1X --------0.04 X= 0.000524UT

Tabla 3: Actividad proteolítica especifica de la muestras problema
Tubo | Concentración de...
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