Lab. bio celular

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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Informe

Organización Subcelular

Laboratorio de Biología Celular

Nombres: Andrea Jara
Leticia Duarte
Fernanda Marín
Carrera: Tecnología Médica
Sección: 8
Profesor (es): María José Días Latas
Juan Morgado
Fecha: 29/04/2010Introducción

Las primeras células eran relativamente simples y pequeñas, similares a los organismos que actualmente conocemos como procariontes. Con el pasar del tiempo ya la evolución de este organismo aparecieron las células eucariontes, más grandes y de organización más compleja, que hoy forman parte de animales y plantas.

A diferencia de las célulasprocariontes, las células eucariontes poseen un núcleo que contiene la mayoría del ADN el cual se encuentra envuelto en una membrana. Esto deja al material genético en un compartimento separado del resto de los contenidos de la célula contenidos en el cito plasma, donde ocurren las reacciones metabólicas.

En el citoplasma se pueden distinguir distintos organelos: cloroplastos, mitocondrias, retículoendoplásmico, aparato de Golgi, ribosomas, peroxisomas, lisosomas, citoesqueleto, los cuales poseen diversas enzimas que cumplen funciones específicas dentro de una célula.

El fraccionamiento Subcelular es una técnica utilizada que permite obtener los componentes celulares aislados, en grandes cantidades y con un alto grado de pureza. Esta técnica consiste en la separación de los componentesde la célula basándose en su tamaño y densidad por lo que los organelos con mayor densidad y tamaño quedan en el fondo del tubo, son llamado pellet y aquellos que poseen una menor densidad con un menor tamaño quedan suspendidos en una solución de nombre sobrenadante.

Objetivos

Comprender la importancia de la técnica de fraccionamientoSubcelular, para así utilizar correctamente los componentes requeridos para la reacción.

Observar e identificar la estructura de la muestra para así dibujar detalladamente lo observado durante el práctico.

Utilizar reactivos para el reconocimiento de una facción Subcelular en particular, con el propósito de provocar cambios de color característicos con los cuales se puede reconocer lapresencia de un organelo en particular.

Hipótesis

Un procedimiento bien elaborado conlleva al resultado correcto

Materiales y Métodos

Primero que todo los profesores prepararon el hígado de rata (Homogenizado filtrado) para que nosotros lo ocupáramos.

Este procedimiento se basa en moler lamuestra en un homogenizador mecánico, en donde se rompen muchas de las membranas de las células. La suspensión de las células rotas las llamamos lisado, y es la que se fracciona en el segundo proceso.

Lo primero que hicimos fue colocar el tubo de centrifugación (Falcon de polipropileno) por 5 min. En hielo antes de iniciar el procedimiento para que estuviera a una temperatura acorde para elhígado, luego en un tubo de centrifugación el profesor puso una muestra de este hígado, luego fue sometido a centrifugación de 2500 RPM RPM (la velocidad mas baja en este caso) a una temperatura de 4°C por 10 min. (El proceso de centrifugación consiste en girar rápidamente los tubos y así separar el pellet del sobrenadante).

Al pasar los 10 min, en el tubo se veían claramente dos fases el pellet(corresponde a los organelos que han sedimentado) y el sobrenadante (corresponde a la fracción liquida que permanece sobre el material sedimentado), el cual con una pipeta sacamos lo que más se pudiera. Al pellet que quedó había que agregarle 1ml de Buffer, y hacerlo una mezcla homogénea (resuspender el pellet).

El sobrenadante sobrante lo pusimos en otro tubito para volver a someterlo a la...
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