Laboratorio De Bioquímica Ii Práctica No. 1: Reacción De La Catalasa Y De La Deshidrogenasa Láctica

DIVISION DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
LICENCIATURA EN CIENCIAS NUTRICIONALES

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II
PRÁCTICA NO. 1: REACCIÓN DE LA CATALASA Y DE LA DESHIDROGENASA LÁCTICA

DRA: MARIBEL PLASCENCIA JATOMEA

PARTICIÓN 2 EQUIPO 10:
GALVEZ PACHECO DANITZA ALEJANDRA
LÓPEZ COVARRUBIAS MELISSA
WONG CHAN EVA JESSENIA

HORARIO:
8:00 – 10:00 HRS.

VIERNES 28 DE SEPTIEMBRE DE2012.

Introducción o Antecedentes.
La actividad enzimática se mide en unidades internacionales (UI). Se define una UI como la cantidad de enzima que produce 1 mol de producto por minuto. La actividad específica de una enzima, una magnitud que se utiliza para controlar la purificación de la enzima, se define como el número de unidades internacionales por miligramo de proteína.
En general,llamamos inhibición enzimática a la disminución o perdida de la actividad enzimática, por la unión a la enzima de moléculas distintas del sustrato, llamadas inhibidores. Muchos medicamentos actúan como inhibidores enzimáticos. La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reacción correspondiente. La unión delinhibidor puede ser reversible o irreversible.
La catalasa es una enzima ampliamente distribuida en la naturaleza y muy importante, ya que su función es la destrucción del peróxido de hidrógeno, producto de varias oxidaciones biológicas y que puede dar lugar a la generación de radicales libres del oxígeno.
La descomposición del peróxido de hidrógeno se puede considerar como la oxidación de unamolécula por otra de la misma especie. La siguiente ecuación describe catalizada por la Catalasa:
H2O2+ H2 O2 O2+ 2H2O
La Catalasa del hígado humano, además del peróxido de hidrógeno, puede utilizar otros tipos de moléculas como sustrato, por ejemplo: alquilos de peróxido de hidrogeno (R-O-O-R) y como segunda molécula puede utilizar moléculas orgánicas donadoras de hidrógeno, como formiatos ocompuestos tiol.
La enzima está muy ampliamente distribuida en las células aerobias. Tiene una masa molecular de 250,000 Daltons, con cuatro grupos heme y un átomo de fierro en el centro de cada heme.
La Deshidrogenasa Láctica o Lactato Deshidrogenasa, es una enzima que cataliza la reducción reversible del piruvato a lactato utilizando como agente reductor a la coenzima NADH. Esta reacción esel paso terminal que caracteriza la glucólisis en el músculo de los vertebrados y diferencia de otras formas fermentativas anaerobias del catabolismo de los carbohidratos.
La enzima pertenece al grupo de las oxidoreductasas con el nombre técnico de L-Lactato: NAD-oxidoreductasa. La forma enzimática más común tiene una masa molecular de 140,000 Daltons y todas las de los vertebrados están formadaspor tetrámero, con cuatro sitios catalíticos. La enzima complete puede disociarse, con pérdida de su actividad, a cuatro unidades de 35,000 Daltons de masa molecular cada una. Para eso se utilizan los desnaturalizantes comunes de las proteínas como la urea, o el cloruro de guanidino, o el dodecil sulfato de sodio (SDS).
Fue con esta enzima con la que los investigadores descubrieron laexistencia de las isoenzimas, es decir, modificaciones moleculares de la misma enzima.

Objetivo.
* Determinar cualitativamente la actividad enzimática de la Catalasa y de la Deshidrogenasa Láctica o LDH.
Materiales y Métodos.
* 1 gradilla.
* 1 vaso de precipitados de 500 ml.
* 1 vaso de precipitados de 250 ml.
* 4 pipetas de 5 ml.
* 9 tubos de ensaye.
* 1 mechero, tripié ytela de asbesto.
* 1 termómetro.
* 1 pipeta Pasteur.

Resultados y Observaciones.

Reacción de la Catalasa:
H2O2 → O2+2H2O

Sustrato: H2O2; Enzima: Catalasa

El tubo 5 que contenía la sangre diluida, por efecto del calentamiento, se tornó de un rojo brillante a café (aproximadamente a los 30 segundos) y luego verdoso.

Al agregar el T5 (tubo 5) al T2 (tubo 2) no hubo reacción....