Laboratorio de enzimas

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UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y ESTADÍSTICAS
ROGRAMA DE MEDICINA

Laboratorio de Actividad Enzimática
Febrero 2012





Introducción


Una enzima es un catalizador natural o biológico. Estas moléculas generalmente son proteínas que dirigen y regulan miles de las reacciones biológicas particulares. Sinser consumidas o transformadas en el proceso que participan las enzimas aumentan la velocidad de una reacción al disminuir la barrera de energía de activación de los reactivos y aumentando la velocidad a la cual se alcanza el equilibrio de reacción, pero no afectan la concentración final de los productos.


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Las enzimas son generalmente proteínas de alto peso molecular. (10.000 –500.000 g/Mol ) Las cuales presentan grupos dentro de su estructura química capaces de interactuar con las moléculas de sustratos en una región especifica denominada sitio activo, para formar un complejo Enzima – sustrato ES.

E + S ES

Debido a las características estructurales propias de la enzima, solamente sustratos muy específicos pueden unirse a ella. Laactividad enzimática está determinada entre otros factores, por la adaptación de la estructura terciaria de la enzima (estructura nativa), que permite en forma extremadamente selectiva la unión al sustrato. Una vez que el sustrato se una al sitio activo, la enzima esta lista para convertirlo en el producto adecuado.

E + S ES E + P

La actividad dela enzima puede ser afectada por factores experimentales tales como: la concentración de enzima y de sustrato, el pH de la solución de reacción y la temperatura de incubación. Los factores ambientales pueden afectar la actividad de la enzima, puesto que los aminoácidos que participan en la unión de la enzima con la molécula de sustrato se afectan con estos factores, también se afecta con estosfactores la estructura terciaria de la enzima y su solubilidad (recuerde que la enzima es una proteína y todos los factores que influyen en su estructura pueden afectar su actividad).
Además de los factores mencionados anteriormente, las enzimas pueden alterar su actividad con la presencia de cofactores o grupos prostéticos, inhibidores o efectores alostéricos.



La amilasa salival

Es unaenzima de peso molecular de 45.000 9/mol, responsable de catalizar la hidrólisis inicial de polímeros grandes de glucosa tales como almidón o glicógeno, en fracciones más pequeñas. Estos fragmentos eventualmente son fraccionados en sus monómeros componentes por otras enzimas digestivas en el cuerpo humano. Las unidades de glucosa son usadas posteriormente por las células como una importante fuentede energía.

La reacción de hidrólisis del almidón, involucra el clivaje (rotura) de un enlace glicosídico mediante la adición de una molécula de agua.

La reacción de hidrólisis de almidón por acción de la amilasa salival, puede ser detectada por la propiedad del almidón no hidrolizado de formar un complejo púrpura (morado) con el yodo. Una vez se inicia la hidrólisis del almidón, elcomplejo se rompe y el color púrpura cambia a café – rojizo y eventualmente desaparece para dar una solución incolora (Fig.1)










NOTA: La solución puede pasar a incolora sin pasar por café rojizo

La taza de hidrólisis puede ser determinada por medición del tiempo empleado en la reacción, monitoreando la presencia del complejo almidón-yodo, representado como el tiempo de cambio decolor de la solución púrpura a incoloro. En este laboratorio se usará esta técnica experimental de manera cualitativa, para observar los efectos de factores como temperatura, pH y concentración de enzima en la cinética de la enzima amilasa salival.


Objetivos:

1. Determinar la taza de hidrólisis del almidón por acción de la amilasa salival, mediante la observación de pérdida de color del...
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