LABORATORIO MEDIOS DE CULTIVO Y COLORACION DE GRAM 1 1 1


LABORATORIO MEDIOS DE CULTIVO Y COLORACION DE GRAM








María Tatiana Caicedo Rojas
Andrés David Castellanos Baquero










UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULAD DE MEDICINA (DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA)
SEDE BOGOTA
27/02/2015

OBJETIVOS


General

Realizar siembra de dos cepas de bacterias en los diferentes medios de cultivos, para su posterior reconocimiento y caracterización pormedio de la tinción de Gram.

Específicos

Identificar los diferentes medios de cultivos dispuestos en la práctica.

Utilizar los dos tipos de siembra (por agotamiento y cuadricula) en los medios cultivos, para el correcto aislamiento del microorganismo.

conocer los fundamentos conceptuales sobre la tinción de gran.

elaborar correctamente, después de realizado el cultivo, la coloración de grampara cada uno.

Describir a detalle los procedimientos y condiciones necesarios para el crecimiento de la bacteria.

caracterizar las bacterias cultivadas por su coloración, forma y agrupación.







METODOLOGÍA

Siembra medio de cultivo
Se dispone de 5 medios de cultivo de diferente naturaleza, 3 de ellos de naturaleza solida y los otros dos semisólidos, en los sólidos son medios con agar (2sangre y uno mcConkey), en los semisólidos ambos agar sim y dos caldos nutritivos con una cepa diferente, cada uno, que se marcaran como CEPA 1 y CEPA 2 estas se sembraran de la siguiente manera:

En el primer agar sangre y en el mcConkey se siembran ambas cepas empleando la Siembra por agotamiento.
En el segundo agar sangre se siembra diversas cepas que se pudo recoger de un frotis de gargantarealizado a uno de los que realizamos el laboratorio, pero en esta ocasión empleando el medio de cuadricula
En los agares sim 1 y 2 se siembra la cepa 1 y 2 respectivamente empleando la siembra indicada para un medio semisólido que será descrito más adelante.
Se realizaron los siguientes procedimientos para la correcta siembra:
En el agar sangre y mcConkey por medio de siembra por agotamiento:

1.Con el asa recta previamente esterilizada se dividen los agares por la mitad para diferenciar cultivo 1 y cultivo 2.
2. Con ayuda del mechero se esteriliza el asa curva hasta que esta tome un color rojo vivo, luego se retirara y se le deja enfriar.
3. El asa curva se introduce en la cepa 1 se revuelve para asegurar que queden bacterias en esta.
4. Se dibujan ligeramente estrías sobre los agaressolamente en un cuadrante cuidando no pasar la línea que divide los cultivos, posteriormente esterilizando el asa curva y dejándola enfriar se realiza en el cuadrante contrario para asegurar el aislamiento de la bacteria.
5. El anterior paso se repite para la siembra de la segunda cepa en la otra mitad del agar e igual para ambos agares.




Para hacer la siembra en un medio semisólido cambia enalgunas cosas:

1. Con el mechero se esterilizo el asa recta de igual forma que con el cultivo anterior.
2. Se introduce el asa en la cepa 1 se agito fuertemente para asegurar que las bacterias se adhieran.
3. Luego se llevo el asa hasta el agar sim 1 y con mucho cuidado se introdujo y se saco rápidamente por el centro.
4. Los paso anteriores se repitieron para la cepa 2 en el agar sim 2.

Una vezrealizada la siempre se esteriliza las asas para evitar el traspaso de bacterias hacia otras personas y los cultivos se llevaron a una incubadora con una temperatura de 37 +- 2 °C, eventualmente por un tiempo de 24 horas, pero para esta práctica se revisaron los cultivo 8 días después de realizada.

Coloración de Gram.
A los 8 días de realizada la práctica de medios de cultivos se recuperaron,para realizar la coloración y la posterior caracterización, para la coloración se reviso las colonias presentes en cada una de los 3 agares (2 sangre y 1 mcConkey) y para cada colonia que creció de las diferentes cepas en ellos se realizo el siguiente procedimiento.












1. Se toma una lamina para el microscopio y se pone una gota se solución salina








2. Con el asa curva previamente...