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PRACTICA Nº3
MICROCULTIVO
INTRODUCCIÒN:
El examen microscópico nos permite descubrir las estructuras fúngicas, lo que nos sirve para la identificación o determinación del organismo. Muchas veces la observación directa de estas estructuras no es adecuada o suficiente para el diagnòstico o identificación del hongo, pues tenemos que han sido alteradas en el manejo, de ahì la importancia dedominar la técnica de microcultivo que nos permite una màs fácil y real observación.
El microcultivo es un método que nos sirve para observar intactas y a intèrvalos regulares, la mayor parte de las estructuras vegetativas y reproductoras de los hongos filamentosos, por lo que se considera un requisito casi indispensable para la identificación y clasificación de los mismos.
OBJETIVO:
Que los alumnosconozcan la forma de un microcultivo, así como su correcta utilización y su elaboración. Que los alumnos observen e identifiquen las diferentes morfologías que se pueden suscitar en el microcultivo.
MATERIALES:
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cajas de Petri con equipo para microcultivo (varilla o tubo de vidrio en àngulo o escuadra, portaobjetos, cubreobjetos) en condiciones de esterilidad.
Pipetade 5 ml estéril
Pinzas de disección
Espátula
Placa con PDA o Agar Sabouraud
Glicerol al 10% estéril
Formaldehido
Medio de Aman
Esmalte transparente para uñas
PROCEDIMIENTO:
1) En condiciones de esterilidad, acomode convencionalmente el portaobjetos y el cubreobjetos sobre la varilla o tubo de vidrio de la caja de petri para el microcultivo.
2) Con la espátula convencionalmente flameadacorte cuadros de la caja de agar de aproximadamente 1 cm2 y colóquelos sobre el portaobjetos de la caja para microcultivo.
3) Inocule su espécimen con el asa recta en los cuatro lados del agar haciendo una leve punción.
4)
5) Coloque el cubreobjetos estéril sobre el cuadro de agar ya sembrado.
6) Agregue glicerol al 10% hasta que se distribuya convenientemente en el fondo de la caja, pero sinque llegue a tocar el portaobjetos que se encuentra sobre la varilla o tubo de vidrio (se puede colocar también un rectángulo de papel filtro que absorba la glicerina y permita mantener la humedad por màs tiempo).
7) Incube a temperatura ambiente hasta que se perciba un ligero crecimiento.
8) Si hace falta agregue màs glicerol al 10% para evitar la desecación.
9) Cuando el crecimiento seasuficiente,agregue de 3 a 5 ml de formaldehido por media hora o màs, para inactivar al hongo.
10) Tome un portaobjetos limpio y agregue una pequeña gota de medio de Aman.
11) Tome con unas pinzas de disección el cubreobjetos del microcultivo y colóquelo sobre el portaobjetos con el medio de Aman.
12) Observe en 10x y 40x.
13) Si la observación no es satisfactoria, haga otra utilizando elportaobjetos del microcultivo, separando previamente el exceso de agar.
14) Selle sus preparaciones con esmalte transparente para uñas, procurando posteriormente no empalmar sus preparaciones.
NOTAS:
a) La manipulación de portaobjetos, cubreobjetos y tubo de vidrio de la caja para microcultivo, debe de hacerse con pinzas para disección convenientemente flameadas.
b) Para la preparación semipermanente,el azul de algodón de lactofenol (medio de Aman) debe agregarse en cantidad adecuada, sin que salga de los extremos del cubreobjetos, pues de tal manera el esmalte no sellarà convenientemente.
c) El crecimiento del hongo no debe rebasar el lìmite del cubreobjetos.
REPORTE DE RESULTADOS
Origen de la muestra: Hongo de pan
Medio de aislamiento: Microcultivo o cultivo en lámina
Fecha deaislamiento: Lunes 28 de noviembre
Morfologìa microscópica:



SECO DEBIL SECO FUERTE
CUESTIONARIO:
1) ¿Cuàl es la utilidad diagnòstica del microcultivo?
El cultivo sigue siendo el "gold standard" del diagnóstico microbiológico, ya que permite la identificación del agente etiológico y la realización del estudio de sensibilidad.  Las principales técnicas podemos clasificarlas de la...
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