Leche
Páginas: 5 (1231 palabras)
Publicado: 23 de junio de 2011
MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Resumen de las prácticas de Microbiología de Alimentos
1° Ingeniero Técnico Agrícola Industrias Agrarias y Alimentarias CURSO 2004-2005
Profesora: Cristina Solano Goñi e-mail: cristina.solano@unavarra.es Tfno. Contacto: Instituto de Agrobiotecnología 948-168024
RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS (ISO 4833, 2003)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir PCA 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando
30 ±1 °C 72 ±3 h
Recuento placas Colonias 15-300
RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN PLACA (ISO 7402, 1993) 10 g muestra 90 ml caldo peptonaDilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir VRBG 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando Añadir doble capa
37 ±1 °C 24 h
Recuento placas Colonias típicas 15-300
(colonias color violeta con halo de precipitación)Confirmación 5 colonias pase a Agar nutritivo Colonias confirmadas como Enterobacterias 37 ±1 °C 24 h
oxidasa – KIA + (fermentación
glucosa)
de
37 ±1 °C 24 h Si es oxidasa – Se siembra un KIA
RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS (NF ISO 7954, 1988)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1
Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-310-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 15 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir OGA 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando
25 ±1 °C 5 días
Recuento placas Colonias 15-300
RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES EN PLACA (NF ISO 4832, 1991)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar dilucionesseriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
X2 Añadir VRBL 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando Añadir doble capa
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
37 ±1 °C 24 h
Recuento placas Colonias típicas 15-300
(colonias color violeta rodeadas o no de halo de precipitación)
INVESTIGACIÓN DE Escherichia coli: PRESENCIA/AUSENCIA 10 g muestra90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar a un tubo estéril 10 ml de muestra 10 ml caldo EC (DC) con campana Durham precalentado a 44 °C 44 °C 24-48 h POSITIVO: Presencia de gas en 1/10 parte de la campana Confirmación Prueba del indol 0,1 ml Caldo de triptona 44 °C 24 h Añadir 3 o 4 gotas del reactivo de Kovacs NEGATIVO: no anillo rojo AUSENCIA NEGATIVO: Ausenciade gas en 1/10 parte de la campana AUSENCIA
POSITIVO: anillo rojo
PRESENCIA
RECUENTO DE Staphylococcus coagulasa positivo EN PLACA (ISO 6888, 1999) 10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml Baird Parker
X2 Extender el inóculo con perlas de vidrioestériles 37 ±1 °C 24 + 24 h Placas 15-150 colonias típicas y no típicas. Confirmación: inocular tubos de BHI con 3 colonias típicas y 3 colonias no típicas 37 ±1 °C 20-24 h Coagulasa
CATALASA Opcional
+
37 ±1 °C 20-24 h Coagulasa positivo
0,1 ml de cultivo (BHI) + 0,3 ml plasma de conejo
25 g muestra 225 ml agua peptona tamponada Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
0,1 ml RVS (10ml) 41,5 ±1 °C 24 ± 3 h BGA
M.K. R.V.
37 ±1 °C 18 ± 2 h
1 ml MKTTn (10 ml) 37 ±1 °C 24 ± 3 h XLD
37 ±1 °C 18 ± 2 h
M.K. R.V.
Colonias no típicas AUSENCIA
BGA: rosas y medio rosa XLD: rojas con centro negro
Colonias típicas
Confirmación Pase de 5 colonias típicas a Agar Nutritivo 37 ±1 °C 18 - 24 h Galería de confirmación API
Serología -
Reacciones bioquímicas -...
1° Ingeniero Técnico Agrícola Industrias Agrarias y Alimentarias CURSO 2004-2005
Profesora: Cristina Solano Goñi e-mail: cristina.solano@unavarra.es Tfno. Contacto: Instituto de Agrobiotecnología 948-168024
RECUENTO DE AEROBIOS MESÓFILOS (ISO 4833, 2003)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir PCA 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando
30 ±1 °C 72 ±3 h
Recuento placas Colonias 15-300
RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN PLACA (ISO 7402, 1993) 10 g muestra 90 ml caldo peptonaDilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir VRBG 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando Añadir doble capa
37 ±1 °C 24 h
Recuento placas Colonias típicas 15-300
(colonias color violeta con halo de precipitación)Confirmación 5 colonias pase a Agar nutritivo Colonias confirmadas como Enterobacterias 37 ±1 °C 24 h
oxidasa – KIA + (fermentación
glucosa)
de
37 ±1 °C 24 h Si es oxidasa – Se siembra un KIA
RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS (NF ISO 7954, 1988)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1
Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-310-4
1 ml
1 ml
1 ml
Suspensión madre: 15 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
X2 Añadir OGA 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando
25 ±1 °C 5 días
Recuento placas Colonias 15-300
RECUENTO DE COLIFORMES TOTALES EN PLACA (NF ISO 4832, 1991)
10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar dilucionesseriadas
10-2
10-3
10-4
1 ml
1 ml
1 ml
X2 Añadir VRBL 15-20 ml, 45-50 °C Agitar homogeneizando Añadir doble capa
Suspensión madre: 45 min a Tª amb como máximo, antes de añadir el medio
37 ±1 °C 24 h
Recuento placas Colonias típicas 15-300
(colonias color violeta rodeadas o no de halo de precipitación)
INVESTIGACIÓN DE Escherichia coli: PRESENCIA/AUSENCIA 10 g muestra90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar a un tubo estéril 10 ml de muestra 10 ml caldo EC (DC) con campana Durham precalentado a 44 °C 44 °C 24-48 h POSITIVO: Presencia de gas en 1/10 parte de la campana Confirmación Prueba del indol 0,1 ml Caldo de triptona 44 °C 24 h Añadir 3 o 4 gotas del reactivo de Kovacs NEGATIVO: no anillo rojo AUSENCIA NEGATIVO: Ausenciade gas en 1/10 parte de la campana AUSENCIA
POSITIVO: anillo rojo
PRESENCIA
RECUENTO DE Staphylococcus coagulasa positivo EN PLACA (ISO 6888, 1999) 10 g muestra 90 ml caldo peptona Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
Filtrar y preparar diluciones seriadas
10-2
10-3
10-4
0,1 ml
0,1 ml
0,1 ml Baird Parker
X2 Extender el inóculo con perlas de vidrioestériles 37 ±1 °C 24 + 24 h Placas 15-150 colonias típicas y no típicas. Confirmación: inocular tubos de BHI con 3 colonias típicas y 3 colonias no típicas 37 ±1 °C 20-24 h Coagulasa
CATALASA Opcional
+
37 ±1 °C 20-24 h Coagulasa positivo
0,1 ml de cultivo (BHI) + 0,3 ml plasma de conejo
25 g muestra 225 ml agua peptona tamponada Dilución 10-1 Homogeneizar (2 min Stomacher)
0,1 ml RVS (10ml) 41,5 ±1 °C 24 ± 3 h BGA
M.K. R.V.
37 ±1 °C 18 ± 2 h
1 ml MKTTn (10 ml) 37 ±1 °C 24 ± 3 h XLD
37 ±1 °C 18 ± 2 h
M.K. R.V.
Colonias no típicas AUSENCIA
BGA: rosas y medio rosa XLD: rojas con centro negro
Colonias típicas
Confirmación Pase de 5 colonias típicas a Agar Nutritivo 37 ±1 °C 18 - 24 h Galería de confirmación API
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