levadura

 DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASEINA
María Jose Ruales- Jeimy Cristina Zambrano-Daniel Sebastián Romo
Departamento de Química (universidad de Nariño)
Pasto (Nariño-Colombia)
jcristina@live.com
2013



Resumen: esta práctica se realizó con el objetivo de establecer el punto isoeléctrico de la caseína; la caseína comprende la mayoría de la proteína de la leche (el 80%) yel suero el resto. Este es una proteína de digestión rápida mientras que la caseína se digiere de manera lenta. También se obtuvo como base caseinato de sodio puro y en leche fresca descremada y pasteurizada por coagulación ácida, neutralización y secado.

Materiales:
Nueve tubos de ensayo
Dos vasos de precipitado de 5ml
Un Erlenmeyer de 250 ml
Pobreta de 50 ml
Dos pipetas graduadasde 1 ml y 5.0 ml
Agitador
Embudo de vidrio mediano
Vidrio de reloj
Papel de filtro flujo rápido
Dos goteros de plástico
Reactivos:
Agua destilada
Ácido acético 0.01 N
Ácido acético 0.1 N
Ácido acético 1.0 N
NaOH 1N
Éter etílico
Etanol al 7%
Materiales de estudiantes:
Leche entera corriente (300 ml)
Toallas absorbentes
Palabras clave: caseína, pH, reactivos, leche, caseinato desodio, toallas, acido, agua destilada, preparación, peso.

INTRODUCCION:
La leche es un producto biológico que contiene más de 25 proteínas diferentes predominando las denominadas caseínas, de las que existen cuatro subclases.
La caseína está compuesta por cuatro diferentes proteínas, la cadena de caseína alfas1, es la proteína más abundante en la leche de la vaca y está formada por 199aminoácidos que presenta una mínima estructura terciaria.

Dependiendo del pH del medio en el que se encuentren los aminoácidos pueden tener carga negativa, positiva o compensada. Por tanto la carga de una proteína va a depender del tipo de aminoácido que la forman y del pH del medio en que se encuentre.
El punto isoeléctrico (pI) es el pH para el cual la proteína presenta carga neta compensada, y enel mismo la solubilidad es mínima a pH>pI la carga que presenta la proteína es negativa y el pH < pI la carga será positiva.
Modificando el pH del medio se pueden neutralizar las cargas, haciendo la carga neta igual a cero, gracias a esto es posible purificar las proteínas. Alcanzando el punto isoeléctrico se precipitaran, en el caso de la caseína se precipita a un pH de 4.8 por lo cual rerequiere acidificar el medio.
RESULTADOS:
A. Aislamiento de la caseína.
Se calienta un vaso e precipitado a 150 ml de agua destilada a 38 0C, se añade 50 ml de leche y luego gota a gota y con agitación se adiciona caído acético 2 M, vemos como empieza a formarse un precipitado puesto que la leche se corta. Luego se deja sedimentar, para posteriormente sedimentar decantar y filtrar con la ayuda delpapel absorbente. Al obtener el precipitado seco se coloca en un vidrio de reloj que antes había sido pesado con muestra y sin ella.
Peso de vidrio solo : 34.499 gr
Peso con muestra: 40.22 gr

Luego de esto se coloca en la estufa como último procedimiento para después de unas horas volver a pesar.
Peso después de estar en estufa: 44.34 gr

B. preparación de la caseína
se colocan 250 mgde caseína en un Erlenmeyer de 15 ml, luego se agrega 20ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 1N, se agita hasta lograr una solución total de la caseína. Una vez disuelta se adiciona 5 ml de ácido acético al 1N y se diluye con agua destilada hasta 5 ml y se mezcla bien.
Se observa una solución bastante clara.

C. pH de la Caseína
Reactivos
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Agua destilada
8.38
7.758.75
8.5
8.0
7.0
5.0
1.0
7.4
Ácido acético 0.01 N (ml)
0.60
1.25
-
-
-
-
-
-
-
Ácido acético 0.1 N (ml)
-
-
0.25
0.5
1.0
2.0
4.0
8.0
-
Ácido acético 1.0 N (ml)
-
-
-
-
-
-
-
-
1.6
pH resultante











En nueve tubos de ensayo limpio y seco adicionamos exactamente los volúmenes de los reactivos según la tabla anterior. Confirmamos el valor...