Libro Microbiologia Prescott McGraw Hill

CAPITULO

2

Estudio de la
estructura microbiana:
microscopía y preparación
de muestras ■ ■
Clostridium botuünum es
una bacteria con forma
bacilar que forma
endosporas y libera la
toxina botulínica, la
causa de la intoxicación
alimentaria denominada
botulismo. En esta
imagen, obtenida
mediante contraste de
fases, la endospora
aparece como un objeto
oval, brillante, localizado
en el extremo delbacilo;
algunas endosporas se
han liberado de las
células que las formaron.

índice
2.1

Lentes y desviación
de la luz 19
2.2 Microscopio óptico 20

2.3

Microscopio de campo claro 20
Resolución de un
microscopio 21
Microscopio de campo
oscuro 23 Microscopio
de contraste
de fases 23 Microscopio de
contraste de
interferencia diferencial 26
Microscopio de
fluorescencia 26
Preparación y tinción
de lasmuestras 28
Fijación 28

Colorantes y tinción
simple 28
Tinción diferencial 29
Tinción de estructuras
específicas 30

2.4 Microscopía electrónica 32
Microscopio electrónico de
transmisión 32
Preparación de la muestra 32
Microscopio electrónico
de barrido 35

2.5 Nuevas técnicas en
microscopía 36
Microscopía confocal 36
Microscopía con sonda de
barrido 38

2.1

Lentes y desviación de la luz

19Conceptos
1. Los microscopios ópticos emplean lentes de vidrio para desviar y enfocar los
rayos de luz, produciendo imágenes aumentadas de objetos pequeños. La
resolución de un microscopio óptico se determina por la apertura numérica
de su sistema de lentes y la longitud de onda de la luz empleada; la
resolución máxima es de aproximadamente 0.2 u.m.
2. Los tipos más comunes de microscopios ópticosson los de campo claro,'
campo oscuro, contraste de fases y de fluorescencia. Cada uno de ellos
ofrece una imagen distintiva y pueden emplearse para observar aspectos
diferentes de la morfología microbiana.
3. Como la mayoría de los microorganismos son incoloros y, por ello, difíciles
de observar con el microscopio de campo claro, se suelen fijar y teñir antes
de su observación. Se puede emplearuna tinción simple o diferencial para
aumentar el contraste. Algunas estructuras bacterianas específicas, como
cápsulas, endosporas y flagelos pueden también teñirse selectivamente.
4. El microscopio electrónico de transmisión alcanza una gran resolución
(aproximadamente, 0.5 nm), al utilizar haces de electrones de longitud de
onda muy corta, en lugar de luz visible. Aunque los microorganismospueden prepararse para su observación de otras formas, se suelen estudiar
cortes finos de muestras incluidas en polímeros y tratadas con metales
pesados para mejorar el contraste.
5. Se pueden apreciar características externas con gran detalle por medio del
microscopio electrónico de barrido, que genera una imagen al escanear la
superficie de las muestras con un haz fino de electrones, en lugar deproyectar electrones a través de las mismas.
6. Nuevos métodos de microscopía están mejorando nuestra capacidad para
observar microorganismos y moléculas. Dos ejemplos de estos nuevos
sistemas son la microscopía confocal de barrido por láser y la microscopía
con sonda de barrido.

I Existen más animales en la suciedad de los dientes de una
boca humana que. hombres en todo un reino.
Antony vanLeeuwenhoek.

L

a Microbiología se ocupa generalmente de organismos tan pequeños que no los puede ver claramente el
ojo humano a simple vista. Debido a la naturaleza de
esta disciplina, el microscopio tiene una importancia crucial;
la mayor parte de los conocimientos sobre los microorganismos se han descubierto con microscopios. Por ello, es fundamental comprender cómo funciona un microscopio y la
formade preparar las muestras para su examen.
Este capítulo comienza con una descripción detallada
del microscopio estándar de campo claro y continúa con
otros tipos de microscopios ópticos. Seguidamente, se exponen las técnicas de preparación y tinción de las muestras
para su examen con el microscopio óptico. A continuación,
se describen los microscopios de transmisión y de barrido
con haz de...