Lowry y biuret

2- Introducción
Durante la realización de estos experimentos, nos basaremos en la colorimetría, que es una técnica muy usada para la determinación de la concentración de una muestra problema. Portanto, al hacer incidir un haz de luz sobre la disolución coloreada se absorberán preferentemente ciertas longitudes de onda, por lo que en el espectrofotómetro mediremos a la longitud de onda de máximaabsorción. Además, cabe destacar que la intensidad del color es proporcional a la concentración de proteína siguiendo así la ley de Lambert-Beer.
Lo que haremos será representar la absorbanciafrente a la concentración, para obtener la curva de calibrado de los distintos tubo de concentración de proteína conocida. Al representarlo obtendremos una línea recta, por tanto, podemos interpolar losvalores de absorbancia de las muestras problema para así obtener la concentración de proteína.
Método de Lowry: Se produce una reacción de la proteína en medio alcalino con los iones Cu2+, formándoseun complejo de coordinación entre el cobre y el nitrógeno peptídico. A continuación, se produce la reacción con el reactivo de Folin-Ciocalteau para fenoles, lo que hace que se reduzca por medio de losgrupos fenol presentes en la proteína a un complejo de color azul oscuro. Este complejo coloreado presenta un máximo de absorción a 650 nm.
Método de Biuret: El reactivo de Biuret contiene CuSO4 ensolución acuosa alcalina. La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones nocompartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2). Por tanto, es un método quedetecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
3- Procedimiento
Método de Biuret
Lo que hemos hecho es preparar...