Métodos de análisis de carbohidratos

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MÉTODOS DE ANÁLISIS DE
CARBOHIDRATOS

* MÉTODOS QUÍMICOS
* MÉTODO FLUORIMÉTRICO
* MÉTODOS ENZIMÁTICOS
* CROMATOGRAFÍA DE GASES
* CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
* MÉTODOS FÍSICOS1.-MÉTODOS QUÍMICOS:
* REACCIONES DEL H2SO4 Y CARBOHIDRATOS
* ÁCIDO FENOL SULFÚRICO
* FUNDAMENTO.- PROVIENE DE LOS PRODUCTOS DE REACCIÓN Y DEGRADACIÓN DEL ÁCIDO Y EL AZÚCAR.
ÁCIDOFENOL SULFÚRICO:
H+ H+
* POLISACÁRIDOS → MONOSACÁRIDOS → F + HMF
∆∆
VENTAJAS DEL MÉTODO:
* ES SENCILLO
* ES RÁPIDO
* SENSIBLE A MUY BAJOS NIVELES DE AZÚCAR (E.G. 5μg)
* ESPECÍFICO PARA CARBOHIDRATOS.
* NO EXISTE INTERFERENCIA CONPROTEÍNAS

* A MENUDO NO ES NECESARIA LA CLARIFICACIÓN DE LA MUESTRA
* LOS REACTIVOS SON BARATOS Y ESTABLES
* COLOR ESTABLE
* RESULTADOS REPRODUCIBLES
* RESULTADOS CONFIABLESDESVENTAJAS DEL MÉTODO:
* MIDE LA MAYORÍA DE LOS CARBOHIDRATOS PERO LA INTENSIDAD DEL COLOR VARÍA AMPLIAMENTE ENTRE LOS CARBOHIDRATOS, POR LO QUE SE DEBE SELECCIONAR UNO DE ELLOS COMO REFERENCIA
* LAPROPORCIÓN DE H2SO4 ES MUY IMPORTANTE YA QUE SE ADICIONA H2SO4 COMO FUENTE DE CALOR A LA MUESTRA ACUOSA.
* SE DEBE EVITAR LA CONTAMINACIÓN PROVENIENTE DEL PAPEL FILTRO O POLVO DE CELULOSA2.-MÉTODO FLUORIMÉTRICO: ESTE MÉTODO ES POSIBLE CUANDO LOS COMPUESTOS ABSORBEN RADIACIÓN A LONGITUD DE ONDA CORTA Y LUEGO EMITEN RADIACIÓN A UNA LONGITUD DE ONDA MÁS LARGA
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA POR ELMÉTODO FLUORIMÉTRICO
* EXTRACCIÓN CON ISO-BUTIL METIL CETONA.
* REACCIÓN CON HIDRACIDA DE ÁCIDO p-HIDROXIBENZOICO
* ADICIÓN DE REACTIVO Y LECTURA A UNA EMSIÓN DE 470nm
* EXCITACIÓN A454nm



3.- MÉTODOS ENZIMÁTICOS: REQUIEREN DE UN EXTRACTO NEUTRO O ÁCIDO LIBRE DE ALCOHOLES Y METALES PESADOS (NO SE PUEDEN USAR SALES DE...
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