macromoleculas laboratorio


ÍNDICE
Introducción
1. Objetivos
1.1 Objetivos Generales
1.2 Objetivos Específicos
2. Marco teórico
3. Sección I: Electroforesis
3.1 Materiales y procedimiento
3.1.1 Materiales y reactivos
3.1.2 Procedimiento
3.1.2.1 Diagrama de flujo
3.2 Resultados
3.3 Análisis
3.4 Conclusiones
4. Sección II: Cromatografía
4.1 Materiales y procedimiento
4.1.1 Materiales y reactivos
4.1.2Procedimiento
4.1.2.1 Diagrama de flujo
4.2 Resultados
4.3 Análisis
4.4 Conclusiones
5. Anexos
5.1 Cálculos
5.2 Tirillas de Cromatografía
5.3 Fichas de bioseguridad
6. Bibliografía
3. SECCIÓN I: ELECTROFORESIS

3.1. Materiales y procedimiento
3.1.1. Materiales y reactivos
Reactivos:

Muestras de suero: una mezcla de sueros normales (muestra patrón) y suero problema.Solución tampón Tris – Borato EDTA (TBE) pH 8.6
Agarosa, suspensión de trabajo 1.5%
Disolución de coloreado de geles. (40% metanol, 5% ácido acético, 0.1% Rojo Ponceau)
Disolución decolorante (40% metanol, 10% ácido acético)
Disolución de secado (40% metanol, 10% ácido acético, 5% glicerol)


Materiales
Los materiales utilizados para realizar el experimento de electroforesis se detallan en latabla número 1.

Tabla Materiales de Experimento de Electroforesis
Matraz de vidrio




Es un recipiente de que se utiliza para contener o medir líquidos.

Puntas amarillas para el micropipeteador

Estas son usadas para transportar volúmenes pequeños, permiten que el trabajo sea más práctico al poder desecharlas y poder usar el mismo micropipeteador para distintos tipos de líquidos.Cubeta de tinción:
Es una cubeta que se utiliza para adicionarle los colorantes a la muestra.


Cubeta de decoloración
Esta cubeta se usa para poner la muestra en solución decolorante

Plancha Calentadora
Es un pequeño aparato que posee uno o más elementos de calefacción eléctrica, y que se emplea para calentar recipientes con líquidos, de forma controlada.

Cámara de electroforesisFue utilizada para la separación de proteínas las cuales se mueven por acción de una corriente eléctrica a través de un gel.


Fuente de poder

Es la que transmite la energía a la cámara de electroforesis.


Micropipeteador (10 μl)
Es un instrumento de precisión para medir pequeños volúmenes de muestras.




3.1.2. Procedimiento


Se preparó el gel de agarosa al 1.5% disuelta entampón TBE, luego se calentó la disolución hasta que la agarosa pasara de ser opaca a transparente lo que significa que la agarosa está disuelta.
Se dejó enfriar el gel por unos minutos y se vertió en la cubeta, con cuidado de no mover los peines que permitirán después de que el gel se solidifique realizar las siembras.
Después de retirar los peines, se adicionó el tampón TBE de forma que tocaralos bordes del gel pero que no lo cubriera en su totalidad.
Se realizó la siembra de 10 microlitros (μl) de cada muestra de suero diluida 7:10, empezando por el pozo 3 con la muestra control y en los pozos 5 y 7 se sembró muestras problema. Adicionalmente se sembró 2 muestras de colorante (azul de bromotimol) en los pozos 1 y 13 para observar el recorrido.
Luego se cargó la muestra en la cámarade electroforesis,se conectó a la fuente de poder y se dejó correr alrededor de 10 minutos. Posteriormente se adicionó más tampón TBE a la cámara hasta que cubriera el gel.
Se cerró la cámara de electroforesis, se conectó nuevamente a la fuente de poder y se dejó correr el gel a 120 voltios por 60 minutos.
Pasado el tiempo el gel se sumergió en solución de tinción aproximadamente durante 15minutos. Luego se retiró el gel de la cubeta de tinción y se sumergió en solución decolorante hasta que se pudieran ver las bandas de proteinograma.



INCLUIR DIAGRAMA DE FLUJO



4.2 Resultados

Para la electroforesis de las muestras de sueros control y problema, de 10 microlitros (μl) cada una, en los pozos 3, 5 y 7, como se indica en la sección “3.1.2 Procedimientos” y la siembra...