Manual de bioquimica

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Universidad veracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 1 “Espectrofotometría” Fundamento: La espectroscopia o espectrofotometría en física y química es el estudio de los espectros. La espectroscopia se basa en que cada elemento químico tiene su espectro característico.

Los espectrómetros son instrumentos que generan, analizan y registran espectros. Aquí seilustra el uso de un espectrómetro de absorción para determinar el espectro creado por una sustancia desconocida. Las lentes del instrumento enfocan la luz, mientras que un prisma central la divide en el espectro de los colores que la constituyen. Los colores que aparecen en la pantalla representan las longitudes de onda no absorbidas por la muestra.

El espectrofotómetro se usa para medir laintensidad de un espectro determinado en comparación con la intensidad de luz procedente de una fuente patrón. Esta comparación permite determinar la concentración de la sustancia que ha producido ese espectro. Los espectrofotómetros también son útiles para estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus elementos de detección son bolómetros o células fotoeléctricas. Los primeros se aplicanespecialmente al análisis de espectros de infrarrojos, y los segundos al de espectros ultravioletas. Las redes de difracción pueden

emplearse, igual que los prismas, tanto en los espectrógrafos como en los espectrofotómetros. El color es la sensación resultante de la estimilacion de la retina por la luz en longitudes de onda comprendidas dentro del espectro visible. Los rayos de luz de diferenteslongitudes de onda excitan a los mecanismos receptores del ojo en grados diferentes produciendo colores especificos, la longitud de onda en el rango visible para el ojo esta entre los 380 – 700 nm. Las longitudes de onda comprendidas a los extremos de éste rango no son detectados por el ojo humano. La radiación electromagnética esta compuesta por paquetes discretos de energia llamados fotones yrecorren un camino ondulante, describiendo en su trayectoria crestas y valles.

APLICACIONES DEL ANÁLISIS ESPECTRAL Análisis químico El espectro de un elemento determinado es absolutamente característico de ese elemento. Sin embargo, elementos distintos producen en ocasiones líneas que están muy juntas, lo que lleva a posibles errores. Por ejemplo, la línea G de Fraunhofer, situada aproximadamenteen 430,8 nm, corresponde a dos líneas diferentes, una debida al calcio, con una longitud de onda de 430,7749 nm, y la otra causada por el hierro, con una longitud de onda de 430,7914 nm. Líneas de Fraunhofer). Con un espectroscopio ordinario sería difícil distinguir estas dos líneas. Las otras líneas del calcio, sin embargo, son muy distintas de las otras líneas del hierro. Por tanto, lacomparación del espectro completo de un elemento con un espectro conocido simplifica su identificación. Cuando se excita una sustancia desconocida mediante una llama, un arco voltaico, una chispa u otro método apropiado, un análisis rápido con un espectrógrafo suele bastar para determinar la presencia o ausencia de un elemento determinado. Los espectros de absorción son muchas veces útiles para identificarcompuestos químicos.

Técnica:

T1

T2

T3

T4

T5

T6

Fotocolorímetro ABSORBANCIA

.4 .3 70 .2 .1 0 60

.5 50 40

.6 .7 30 .8 20 10 0 .9 1.0

TRASMITANCIA

80 90 100

Tabulacion: Fotocolorímetro Tubos Absorbancia 1 0

Trasmitancia 100

Blanco

2 3 4 5 6

.800 .700 .530 .351 .215 .660

15 20 29 44 61 22

Tubo Problema

Graficación:

Universidadveracruzana Facultad de Bioanálisis Bioquímica Laboratorio

Practica: No. 2 “Método de Dacie y Lewis” Fundamento: Eritrocitos Los glóbulos rojos, o células rojas de la sangre, tienen forma de discos redondeados, bicóncavos y con un Los eritrocitos, o glóbulos rojos de la micras. En diámetro aproximado de 7,5 sangre, son los transportadores primarios el ser humano y la mayoría de los mamíferos los...
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