Marco teórico de adn y electroforesis


Marco Teórico
Historia de la extracción del ADN
Johan Friedrich Miescher (1844-1895), un biólogo suizo, fue el primero en descubrir lo que hoy llamamos ADN. Aisló varias moléculas ricas en fosfatos, a las cuales llamó nucleínas (actualmente ácidos nucleicos), a partir del núcleo de los globulos blancos en 1869, preparando el camino para su identificación como los pportadores de lainformación hereditaria, el ADN (ácido desoxirribonucleico.
Este descubrimiento que se publicó por primera vez en 1871, al principio no pareció relevante, hasta que Albrecht Kossel hizo sus primeras investigaciones en su estructura química.

Fundamento del práctico
La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmáticapara poder acceder al nucleo de la celula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ultimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución yposterior extracción de la celula, Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente vaciándose su contenido molecular en agua, en la que se disuelve el ADN. Envese momento, el agua contiene ADN y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrá fraccionado en cadenas mas pequeñas y separadas de el por acción del detergente. Soloqueda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla para lo cual se utiliza el alcohol.





Kit de extracción de ADN
Hace unos años era necesario preparar para cada ocasión una serie de tampones o buffers para poder extraer el material hereditario. Y cada disolución tenía que prepararla cada uno. Ahora todo es muy sencillo. Existen kits de extracción para cada tipo de tejido o muestra a analizar. Lautilización de estos kits tienen sus pros y sus contras: generalmente la eficiencia de la extracción (la cantidad de ADN obtenido por extracción) suele ser bastante mayor con los métodos tradicionales. Sin embargo, la pureza del ADN aislado es mayor cuando se usan los kits. Dependiendo para qué se vaya a utilizar el ADN y el tipo de estudio, será mejor tener más ADN y menos puro o viceversa. Lasnuevas tecnologías suelen “funcionar” mejor cuanto más limpia sea la extracción, ya que en muchas ocasiones recomiendan purificarlo.
A modo informativo y dependiendo de la muestra, el tiempo para extraer ADN oscila entre 30 minutos y una hora. Cuantas más muestras se tengan a extraer a la vez mayor será el tiempo.
Cuando ya se tiene el vial con el ADN disuelto en el tampón de elución, siemprehay que hacer una cuantificación.

Cámara Electroforética
La electroforesis es un proceso que se utiliza para separar macromoléculas en una solución.  La electroforesis en agarosa permite separar moléculas de DNA, cuando éstas son sometidas a un campo eléctrico y atraídas hacia el polo opuesto a su carga neta.  Hay dos fuerzas de acción opuesta que determinan la velocidad de lapartícula.  Primero, la fuerza eléctrica atrae en DNA hacia el electrodo y la intensidad de la atracción es directamente proporcional a la carga.  Segundo, la fuerza de rozamiento se opone a la migración y su intensidad depende del tamaño y la forma de la partícula.
 
El DNA está compuesto por cuatro nucleótidos que tienen carga negativa y peso molecular similar.  Por lo tanto, la aceleración impuesta por la fuerzaeléctrica es igual para cualquier molécula de ácido nucleico.  La diferencia en velocidad de migración estará dada por diferencias en la fuerza de rozamiento, o sea por la forma y tamaño de la molécula de DNA.  En el caso del DNA doble cadena, la forma es la misma para cualquier molécula, entonces las distintas moléculas tendrán una velocidad que sólo dependerá de su tamaño, es decir, de su...