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3.6 Tinción simple, tinción diferencial

La mayoría de los colorantes de células o tinciones son de naturaleza orgánica y aromática. Existen dos tipos generales de colorantes: básicos y ácidos. En los básicos, el grupo cromóforo (que da el color) es básico o catiónico, por ejemplo el grupo azo (N=N). Los colorantes ácidos poseen generalmente grupos nitrilo (NO2) o aromáticos. Ejemplos decolorantes ácidos son eosina y azul de anilina. De colorantes básicos, azul de metileno, cristal violeta y azul de toluidina.

El mecanismo de acción de la mayoría de los colorantes se basa en la propiedad de proteínas, ciertos polisacáridos y ácidos nucleicos de ionizarse como ácidos o como básicos, lo que les permite reaccionar con los grupos cromóforos de las tinciones.
La carga neta de lasmoléculas es la que determina con qué tipo de colorante reacciona, y es lo que permite realizar tinciones específicas para distintos tipos de moléculas y estructuras celulares.


Existen numerosas tinciones que se utilizan en microscopía y permiten una mejor observación de las estructuras celulares al contrastar en forma selectiva moléculas determinadas. Generalmente se usan diferentescolorantes, algunos ejemplos de ellos son el lugol que tiñe los granos de almidón de color azul-morado, la floroglucina que tiñe de rojo violeta las paredes celulares lignificadas, el azul de metileno que tiñe el protoplasma y las paredes celulares celulósicas, etc.
La fijación es un método que se utiliza para preservar la morfología y la composición química de las células que componen una preparaciónmicroscópica. Consiste en agregar agentes fijadores a la muestra como acetona, formaldehído o glutaraldehído, los cuales mantienen las interacciones entre las moléculas (proteínas, ácidos nucleicos, etc.) y permiten que las preparaciones duren en buen estado durante meses o años.

Uno de los métodos más utilizados para realizar preparaciones permanentes consiste en fijar el material deinterés en una solución FAA (formaldehído-alcohol-ácido acético), concentración (entre 50 y 100%) y finalmente embeberlo en parafina para obtener bloques que puedan ser cortados en secciones muy finas utilizando un micrómetro.

Estas secciones que contienen material fijado y desecado se colocan cuidadosamente en un portaobjetos, y se disuelve la parafina con un solvente orgánico como xilol. Una vezhecho esto, la muestra se tiñe para contrarrestar las distintas estructuras celulares y se protege con un cubreobjeto montado sobre una sustancia sellante.

Tinción de Bacterias
Si se desean observar las características morfológicas de las bacterias, resulta sumamente útil el utilizar las preparaciones fijas y teñidas, debido a que estas permiten que las células se visualicen de mejor maneray se puedan diferenciar las distintas especies por su coloración, este método en particular se llama tinción diferencial o selectiva.
Los pasos a seguir para la tinción de las bacterias es hacer el frote, la fijación y la aplicación de las soluciones colorantes. La amplia gama de colorantes que se pueden utilizar, ha obligado a separarlos en tres grupos generales, los de trifenilmetano, los deoxacina y los de tiacina. Esta clasificación es buena para la distinción de las familias de colorantes, pero en general se utiliza la clasificación de acuerdo a su carácter ácido – base, es decir, ácidos, bases o neutros, debido a que de esto depende mucho su comportamiento.
La coloración se da de acuerdo con a la acción de los iones complejos del colorante y los sitios activos de la superficieo del interior de la célula.
Entre los diversos tipos de coloración de bacterias, están la coloración simple, diferencial y la tinción negativa.
Coloración Simple:
Este tipo de coloración consiste en inundar con un colorante cualquiera la lámina donde se tienen las bacterias, luego lavarlas con agua, y algunas células retendrán el colorante, por reacción con el mismo.
Coloración...