maturana






LABORATORIO
SEPARACION
DE
PROTEINAS






NOMBRES:




SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS


Objetivo:

Conocer diferentes técnicas utilizadas para la separación de moléculas,como proteínas.
Separar una mezcla de moléculas (Diclorofenol-indofenol, DCPIP y Hemoglobina) utilizando la técnica de Cromatografía de exclusión molecular.

Calculos y resultados:

Datos:Longitud de Onda Analítica Hemoglobina 420
Longitud de Onda Analítica DCPIP 580
Peso Molecular Hemoglobina 64 Kd
Peso Molecular DCPIP 29,1 g/mol



Nº Tubo

Volumen
Absorbancia
λ 420Absorbancia
λ 580
1
5 ml
0,214
0,054
2
10 ml
4,469
0,960
3
15 ml
1,635
0,458
4
20 ml
0,892
0,306
5
25 ml
0,530
0,358
6
30 ml
0,344
0,580
7
35 ml
0,232
0,856
8
40 ml0,138
0,982
9
45 ml
0,097
0,943
10
50 ml
0,076
0,770
11
55 ml
0,045
0,553
12
60 ml
0,027
0,351
13
65 ml
0,017
0,214
14
70 ml
0,010
0,122
15
75 ml
0,011
0,068
16
80 ml0,003
0,038
17
85 ml
0,002
0,018
18
90 ml
0,002
0,011
19
95 ml
0,001
0,05
20
100 ml
0
0,003





A partir de los datos de la tabla anterior, Indicar el Volumen de elusión
de HB yde DCPIP :

Ve(ml)
HB
10
DCPIP
40


Gráfico: Cromatograma HB – DCPIP (2.0 ptos). Realizar las dos curvas en el mismo grafico, debe indicar claramente a que molécula corresponde cada curva ysu respectiva λ.
EN HOJA ADJUNTA


Cálculo de Kav HB y DCPIP. (Incluir formulas)
Calculo V total
Calculo Vo
Calculo Kav HB
Calculo Kav DCPIP

Ve = es el volumen de elusióndel constituyente donde va la máxima absorbancia de las proteínas que utilizamos
Vt= el volumen total de la columna, donde 3,1416, r2 = 1 y h = 5 cm3
Vo = volumen intersticial de la columna o el35% del Vt

KAV = Ve - Vo
Vt – Vo

Vt = · r2 · h
Vt = 3,1416 * 2/2 * 5 = 15,708
Vo = volumen intersticial de la columna ( fase movil)


Kav HB= 10ml – 5,5 cm3 =...