Medicina ingenieria g

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I.E.S. “RÍO CABE”

INGENIERÍA GENÉTICA

BIOLOGÍA 2º BAC

INGENIERÍA GENÉTICA Y APLICACIONES
 CLONACIÓN DE DNA: FUNDAMENTOS O ENZIMAS DE RESTRICCIÓN O RECORDANDO LO QUE ES UN PLÁSMIDO O MANIPULACIÓN DE GENES. CLONACIÓN DE ADN REPASO DE LA REPLICACIÓN, TRANSCRIPCIÓN, TRADUCCIÓN Y EL CÓDIGO GENÉTICO. PROYECTO GENOMA. TECNICA DE LA “PCR”. EXPERIMENTO DE CLONACIÓN. APLICACIONES: O CIENCIASBIOMÉDICAS O MEJORA DE ESPECIES O VEGETALES CULTIVOS TRANSGÉNICOS.

     

 CLONACIÓN DE DNA: FUNDAMENTOS
Clonar significa hacer copias idénticas; es un término que en principio sólo se refería al procedimiento de aislar una célula de una gran población y permitir su reproducción para generar muchas células idénticas. De este modo, se disponía de suficientes cantidades de un único tipocelular para su estudio. Análogamente, la clonación de DNA comporta la separación de un gen específico o fragmento de DNA de su cromosoma, mucho mayor, y la unión a una pequeña molécula de DNA portador, para replicar este DNA modificado mil e incluso millones de veces. El resultado es una amplificación selectiva de un gen o fragmento de DNA particular. La clonación de un fragmento de DNA, bien seaprocariótico o eucariótico, comporta cinco procedimientos generales:  Un método para cortar el DNA en una localización precisa. El descubrimiento de las endonucleasas de restricción permitió disponer de las tijeras moleculares necesarias.   Un método para unir covalentemente dos fragmentos de DNA. La DNA ligasa puede hacerlo. Selección de una molécula de DNA pequeña capaz de autorreplicarse. Lossegmentos de DNA que se quieren clonar pueden unirse a plásmidos o a DNA víricos (vectores de clonación). Aquellas moléculas de DNA compuestas que contienen unidos covalentemente segmentos derivados de una o más fuentes se denominan DNA recombinante.  Un método para trasladar el DNA desde el tubo de ensayo hacia el interior de una célula huésped que ofrece la maquinaria enzimática necesaria parala replicación de este DNA.  Métodos para seleccionar o identificar aquellas células huésped que contienen el DNA recombinante. Los métodos utilizados para llevar a cabo estos procesos, y otros relacionados, se denominan en conjunto tecnología de DNA recombinante, o más informalmente ingeniería genética. Escherichia coli, que fue el primer organismo utilizado en trabajos de DNA recombinante yque todavía continúa siendo el huésped más común. E. coli tiene muchas ventajas: se conoce bastante bien el metabolismo de su DNA (y muchos otros procesos bioquímicos), muchos vectores de clonación que se encuentran de manera natural asociados con E. coli, como bacteriófagos y plásmidos están bien caracterizados y se dispone de técnicas efectivas para el traspaso de DNA de una bacteria a otra.Enzimas de restricción
Hacia 1970 se descubrieron unas enzimas presentes en determinadas bacterias que eran capaces de romper el ADN extraño que podía infectarlas. Estas nucleasas de restricción rompen el ADN reconociendo secuencias específicas en 1

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él y generan, por tanto, los mismos fragmentos en un ADN determinado. Se conocen másde 100 nucleasas de restricción distintas, cada una de las cuales rompe en una secuencia diferente. Son ejemplos: Al romper la molécula de ADN, algunas enzimas de
5’ 3’ 3’ 5’

GAATTC C T T A A G5’

Eco RI

3’

G + C T T A A5’

3’

5’

AATTC 3’ G5’

3’

restricción cortan las dos cadenas del ADN en el mismo nucleótido, pero, en cambio, hay muchas enzimas de

restricción quecortan cada cadena por lugares separados y, al hacerlo, generan extremos cohesivos (pegajosos), que permitirán que las moléculas de ADN que los lleven formen puentes de hidrógeno y tiendan a juntarse. Esta situación permite unir fragmentos de ADN de procedencia diferente, siempre que se hayan roto con la misma enzima de restricción.

“Recordando lo que es un plásmido...”
Es un trozo de ADN...
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