Membrana

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias Biológicas.
Laboratorio de Fisiología Celular.
Profesores: Katherine Yorguie Pino Azocar
Miguel Ángel García Rojas.

Trabajo Práctico Nº1:
“Membrana y Mecanismos de transporte’’

Sección de laboratorio: Bio-135-3Fecha de realización: 25 de Marzo 2011
Integrantes: Javiera Gallo
Nicole Carrasco
Diego EspinozaDiego Arriagada

-2011-

Introducción.

Todas las células mantienen su organización morfofuncional debido a una membrana que las limita del medio externo, su estructura lipoprotéica permite el transporte selectivo de moléculas e iones de un compartimiento a otro.

El componente líquido de nuestro organismo se divide entre el liquido intracelular y elliquido extracelular ambos contienen diferentes sustancias como aminoácidos, ácidos grasos colesterol iones moléculas polares, etc. La membrana celular separa estos dos compartimientos y, a través de ella, se realiza el transporte selectivo de sustancias por distintos procedimientos que conservan las diferencias entre estos dos medios, al ser la membrana más permeable a unas sustancias que aotras.

Dentro del conjunto de procesos que provocan el paso de moléculas a través de la membrana podemos diferenciar dos tipos de transporte: activo y pasivo.

Dentro del transporte pasivo el cual es a favor del gradiente de concentración se encuentra la difusión y la osmosis. Mientras que el transporte activo el cual es en contra del gradiente de concentración y hay gasto de energía,se puededestacar la bomba sodio-potasio

Materiales y Métodos.

El primer trabajo práctico (osmosis en un sistema viviente), se comenzó con tres tubos en los cuales se agregó 30µL de sangre entregada previamente en cada uno, y luego en el primero se agregó 60µL de solución de NaCl al 0.4% , 60µL de una solución de NaCl al 0.9% en el segundo, y 60µL de una solución de NaCl al 1.8% en el último; sehomogeneizaron las soluciones y con ayuda de una micropipeta se tomó alrededor de 20µL de cada tubo y se colocaron en tres portaobjetos para su posterior visualización en el microscopio (40X) y se identificaron las diferencias en las muestras.

En el segundo trabajo práctico (Obtención de membrana de eritrocitos) de la muestra de sangre entregada, se extrajo 100 µL de esta y se introdujo al recipientecorrespondiente. Dicha sangre se centrifugó a 5000 rpm por cinco minutos. Pasado ese tiempo, se sacó de la centrifuga y se eliminó el sobrenadante que se formó utilizando una micropipeta. Luego de esta actividad, se extrajo 500 µL de Solución de Lisis y se procedió a resuspender suavemente hacia la composición restante. Al resuspender, se ingresa suavemente la solución de lisis, y con lamicropipeta, se homogeniza, al aspirar y expulsar varias veces la mezcla en cuestión. Ya con la resuspension terminada, se volvió a centrifugar, esta vez a 13400 rpm, por 10 minutos, y se eliminó el sobrenadante formado de la misma forma que el anterior. Al tener lista esta mezcla, se volvió a resuspender, por medio de la solución de Resuspensión, a una cantidad de 100 µL y se llevó al hielo, donde seconservó hasta que se utilizó de nuevo, en los próximos experimentos.

En el tercer trabajo práctico (cuantificación de proteínas) El extracto de membranas previamente puesto en hielo se saco de el, se extrajo 10 µL, la cual fue diluida en 240 µL de Agua Destilada. Inmediatamente después, se agregó 100 uL de una “Solución A” y toda la mezcla se incubó a 50 ºC por cinco minutos.
Luego, se agregó...