Metabolitos nitrogenados

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METABOLITOS NITROGENADOS:

DETERMINACIÓN DE UREA, CREATININA Y ÁCIDO ÚRICO

Objetivos

• Realizará la determinación sérica de Urea, Creatinina y Ácido Úrico.
• Identificará las patologías relacionadas con la alteración de los valores de urea, creatinina y ácido úrico.
• Integrará la realización de ésta práctica al metabolismo de las proteínas y ácidos nucléicos, dando un enfoque médicopara la utilidad de dichos estudios.

INTRODUCCIÓN

La urea es un metabolito producido en el hígado y excretado por el riñón, como producto del catabolismo de las proteínas. Cuando existe una hepatopatía grave la concentración de nitrógeno ureico disminuye y aumenta la concentración de NH3. La creatina es sintetizada en el hígado a partir de la metionina, glicina y arginina. En el músculoesquelético la creatina es fosforilada a fosfocreatina, la cual es un importante almacén energético para la síntesis de ATP. La creatinina es un derivado de la fosfocreatina que se excreta en la orina, siendo su tasa de excreción relativamente constante día a día. Cuando se acumulan en la sangre productos de degradación del metabolismo proteico, se presenta el síndrome conocido como uremia; elnitrógeno ureico de la sangre (NUS) y la creatinina están elevados, y los niveles sanguíneos de éstas sustancias se emplean como índice de la gravedad de la uremia.
El ácido úrico es producto del catabolismo de las purinas; en el hombre se excreta por la orina. La excreción de ácido úrico en una dieta exenta de purinas es aproximadamente de 0.5 g/24 hrs. y cerca de 1 g/24 hrs en una dieta regular.Cuando la concentración de ácido úrico sanguíneo se incrementa, se produce una enfermedad denominada “Gota”, que se caracteriza por ataques recurrentes de artritis, depósitos de uratos en las articulaciones, riñones y otros tejidos, así como por la excreción de grandes cantidades de ácido úrico en la orina.

FUNDAMENTO

➢ UREA

La urea se hidroliza por acción de la ureasa formando amoniaco ybióxido de carbono como productos finales. El ión amonio producido en ésta reacción se combina con el alfa-cetoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa, dando como resultado glutamato más NAD. El consumo de NADH, que se mide por la disminución de su absorción en la región ultravioleta, es proporcional ala cantidad de urea en la muestra:

Urea + 2 H2O ------- Ureasa------( CO2 + NH4 +

NH4 + + alfa-cetoglutarato + NADH ------ Glutamato DH ----( Glutamato + NAD+

➢ CREATININA

La creatinina en solución alcalina reacciona con el picrato para formar un compuesto rojo anaranjado (Reacción de Jaffé), color que es medido por la lectura en dos puntos.

➢ ACIDO ÚRICO

El ácido úrico es convertido por acción de la uricasa en alantoína yperóxido de hidrógeno, el cual en presencia de peroxidasa, oxida al cromógeno (N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropilo) n-toluidina( en un compuesto de color rojo.

REQUISITOS

A. Contestar el cuestionario.
B. Investigar las patologías en las cuales se encuentren alterados los valores normales de urea, creatinina y ácido úrico.

MATERIAL

9 Tubos de ensaye
1 Gradilla
1 BañoMaría/termómetro
1 Equipo RA 50
4 Pipetas serológicas de 5 ml
1 Micropipeta de 50 μl
1 Micropipeta de 200 μl
1 Micropipeta de 20 μl
Puntas para micropipeta (azules y amarillas)
1 Jeringa y ligadura
Torundas alcoholadas
Centrífuga
1 Cronómetro

REACTIVOS

SPINREACT

- Urea:
*Estándar
*Reactivo 1 (tampón)
*Reactivo 2 (enzimas)

- Creatinina:
*Estándar*Reactivo 1 (reactivo pícrico)
*Reactivo 2 (reactivo alcalinizante)
- Ácido úrico:
*Estándar
*Reactivo 1 (tampón)
*Reactivo 2 (enzimas)

MUESTRA BIOLÓGICA: Suero o plasma (con heparina o EDTA), no hemolizados o lipémicos.

PROCEDIMIENTO

A. DETERMINACIÓN DE UREA

Longitud de onda: 340 nm
Cubeta. 1 cm de paso de luz
Temperatura: 37 oC
Lectura: Contra...
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