Metodo de bradford y lawry

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Curso Practico de Métodos de Análisis

DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE LAWRY Y BRADFORD

FIGUEROA MONTOYA ALDO

03 - SEPT-2010

Objetivos:

• Elaborara una curva de calibración para la cuantificación de proteínas empleando un método fotométrico.

• Determinara si hay diferenciaestadísticamente significativa en la precisión y la exactitud entre métodos de Bradford y Lowry.

• Conocerá el efecto de las sustancias no proteicas, en el desarrollo de color.

• Analizara las ventajas y desventajas del método de lowry, con respecto a otros métodos para la cuantificación de proteínas

• Determinara el efecto de algunas sustancias no proteicas que pueden interferir enel método.

Procedimiento

Curva de calibración: (Lowry)

Las lecturas de absorbancia a 590nm mostradas en la siguiente tabla fueron tomadas para la elaboración de la curva de calibración.

|Tubo |Cantidad de proteína |Serie a |Serie b |Serie ajustada por regresión |
| |(μg) | ||lineal |
|1 |25 |0.076 |0.072 |0.0837 |
|2 |50 |0.139 |0.138 |0.13505 |
|3 |75 |0.243 |0.207 |0.1864 |
|4|100 |0.188 |0.19 |0.2377 |
|5 |125 |0.31 |0.301 |0.2788 |

Aplicando regresión lineal, la ecuación nos da de la siguiente forma:
|A= absorbancia |
|C= concentración |

Y=mx+b
A=mC+b ………… A =0.0022C+0.0365

Obtención de la concentración de las 10 replicas del tubo 3 y de los 5 tubos con sustancia no proteica a partir de la concentración de la ecuación anterior.

|Tubo |A 590 |Cantidad de proteína |(x-#)^2 |
| | |(μg) | |
|1 |0.195 |79.25|6.5025 |
|2 |0.198 |80.75 |1.1025 |
|3 |0.195 |79.25 |6.5025 |
|4 |0.212 |87.75 |35.4025 |
|5 |0.189 |76.25 |30.8025 |
|6 |0.2 |81.75|0.0025 |
|7 |0.198 |80.75 |1.1025 |
|8 |0.214 |88.75 |48.3025 |
|9 |0.196 |79.75 |4.2025 |
|10 |0.204 |83.75 |3.8025 |
| |∑|818 |137.725 |
| |# |81.8 | |

Análisis estadístico:

Desviación estándar S=[pic]

Coeficiente de variación C.V =[pic] X100

Intervalos de confianza:
t= α= 95% grados de libertad= n-1 = 9 t= 2.262 valor tomado de tablas.

µ = Ẋ ± [pic]µ= 78.38- 85.21 intervalo

Efecto de sustancias no proteínicas
Para calcular la cantidad de proteína, utilizamos la ecuación de la recta ya mencionada;

|Tubo |Sustancia |A 590 |Cantidad de proteína |Tipo de interferencia generada |
| | |...
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