METODOS DE CUANTIFICACION DE ADN

METODOS DE CUANTIFICACION DE ADN

FLUOROMETRÍA
Fundamento:
capacidad de unión del ADN a ciertos tintes fluorescentes como H33258.
Comparación de las muestras problema con muestras de cantidad deADN conocida
Se utiliza un Fluorímetro: lámpara de mercurio y un detector para medir fluorescencia relativa a 460nm
ADN de doble cadena

Protocolo:




ESPECTROFOTOMETRÍA
El ADN, el ARN, losoligonucleótidos e incluso los mononucleótidos pueden cuantificarse directamente en soluciones acuosas, en forma diluida o sin diluir, midiendo la absorbancia A (o densidad óptica, DO) de luz ultravioleta(también puede hacerse en el intervalo visible). Si la muestra es pura, es decir, no contiene cantidades significativas de contaminantes como proteínas, fenol o agarosa, la medición espectrofotométrica de lairradiación ultravioleta absorbida por las bases es sencilla y exacta. En este método, los tampones acuosos con escasa concentración iónica (por ejemplo, tampón TE) resultan idóneos. La concentraciónde ácidos nucleicos suele determinarse midiendo a 260 nm y comparando con un blanco. La interferencia de contaminantes puede determinarse calculando un «cociente». Dado que las proteínas absorben a280 nm, se emplea el cociente A260/A280 para calcular la pureza de los ácidos nucleicos. Los cocientes respectivos del ADN y el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y 2,0. Una absorción a 230 nmsignifica que la muestra está contaminada con hidratos de carbono, péptidos, fenoles, compuestos aromáticos u otras sustancias. El cociente A260/A230 de las muestras puras es de 2,2 aproximadamente. Cuandola cantidad disponible de ácidos nucleicos es escasa, puede emplearse el método de la placa de agarosa con bromuro de etidio. Permite calcular la cantidad de ácidos nucleicos a partir de la intensidadde la fluorescencia emitida por el Extracción y Purificación de ADN 10 Análisis de la Presencia de Organismos Genéticamente Modificados en Muestras de Alimentos bromuro de etidio irradiado con...