Metodos De Cuantificacion De Proteinas

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Métodos de cuantificación de proteínas

Las proteínas son las moléculas más abundantes en la célula, están constituidas por una serie de aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos, dicho enlace es covalente y se lleva a cabo entre un grupo carboxilo y un grupo amino, de forma que en la cadena polipeptídica quedan siempre 2 extremos libres, un amino y un carboxilo terminal, algunasproteínas necesitan la participación de grupos de naturaleza no proteica para que puedan ser funcionales, y se conocen como grupos prostéicos, para poder estudiar la estructura de una proteína, la actividad de una enzima o el contenido proteínico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de las proteínas.
Los cromóforos proteicos son de 3 categorías: Los enlacespeptídicos, las cadenas laterales de algunos aminoácidos y los grupos protéticos. Hablando de manera cuantitativa, decimos que el enlace peptídico es el cromóforo más importante de una proteína ya que hay tantos como aminoácidos tenga la proteína máxima. Su longitud de onda máxima se encuentra en torno a los 200 nm, es decir que se trata de un cromóforo que absorbe en la región del ultravioleta lejano. Lapresencia de un grupo prostéico con bandas de absorción en el visible suele ser una característica muy útil al momento de identificar una proteína, ya que presenta características espectrales muy particulares, las cuales permitirán su detección incluso en la presencia de otras proteínas, en la mayoría de los casos el grupo protético participa directamente en la reacción catalizada, esto si se tratade una enzima o también si es el soporte funcional de su acción.
Si se trata de otro tipo de molécula suele ocurrir que mientras sucede la catálisis o durante los cambios funcionales que sufra la molécula, se alteran sus propiedades ópticas, el hecho de que estás variaciones tengan lugar en la zona visible, permite su seguimiento y caracterización de forma sencilla y precisa, incluso no esnecesario recurrir ala presencia de una muestra homogénea. Existen diversos métodos para la cuantificación de las proteínas, la mayoría basados en los patrones de absorción de las radiaciones electromagnéticas de los grupos aromáticos. Entre ellos encontramos: Kjeldahl, Absorción a 280 nm, Lowry, Bradford, BCA, Espectrofotométrico, Turbidimétrico, Dumas, Nefelometría Reacción de Biuret, O-ftalaldehido.A continuación se procederá a explicar en que consiste cada uno de estos métodos de cuantificación de proteínas, así como en que condiciones se llevan a cabo, su longitud de onda, y para que sirve cada uno de ellos.

Método de Kjeldahl
Todas las proteínas contienen aproximadamente un 16% de nitrógeno, sabiendo la cantidad de nitrógeno podemos obtener una estimación de la cantidad de proteínatotal gracias a la relación: Nx100/16. Consta de un procedimiento algo complicado, se considera poco sensible ya que requiere cantidades superiores al 50 mg de muestra, basado en la determinación de nitrógeno proteico total de una proteína. Consiste en la digestión completa H2SO4 de la preparación, transformando así todo el nitrógeno proteico presente en NH3, por medio de una destilación, otambién mediante digestión en caliente con ácido sulfúrico; este proceso requiere la presencia de iones cúpricos y por lo tanto necesita varias horas, para llevarse acabo, ya que de otro modo obtendríamos NH4OH. Los iones NH4+ son valorados con HCl, utilizando como indicador rojo metilo. A partir del número de equivalentes utilizados, es posible conocer la cantidad de nitrógeno presente y si semultiplica por el factor adecuado, la cantidad de proteína presente.
A pesar de ser un método complicado es considerado común por lo que permite una comparación fácil de los resultados con otros laboratorios, como todo método de análisis posee ciertas ventajas y desventajas entre las cuales encontramos que el método de Kjeldahl posee una elevada precisión, capaz de discernir entre muestras con una...
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