Metodos de cultivo, aislamiento de bacterias y tecnicas de siembra.

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  • Publicado : 29 de marzo de 2011
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METODOS DE CULTIVO, AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y TECNICAS DE SIEMBRA.

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RESUMEN
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos, donde se implemento los diversos métodos de siembra efectuados y posteriormenteincubamos para obtener formadoras de colonias.

INTRODUCCION
El tipo de microorganismo que será utilizado en este laboratorio serán bacterias de la E.coli. Las bacterias se cultivan sobre materiales conocidos como medios de cultivo. La composición química o nutricional de los medios es extremadamente variada (Práctica Medios de Cultivo). Los medios más comunes son los caldos (medios líquidos),tubos con agar inclinado, tubos con agar y cajas de Petri con agar o placas de agar. El agar es una sustancia derivada de un alga marina que se solidifica como un semisólido tipo gelatina. Cuando se añaden nutrientes y otros factores de crecimiento, muchos tipos de bacterias pueden cultivarse en él.
Para Sembrar es necesario colocar una muestra de inóculo, en un medio de cultivo para obtener elcrecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel (Agar) al que se han añadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con líquidos nutritivos para los microorganismos y posterior a ello se procede a la "incubación"del medio ya sembrado. En cada caso se hace en condiciones particulares de presión de oxígeno, temperatura, agitación, duración, etc. Muchas de las bacterias patógenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37ºC habituales de nuestro organismo.
Si el cultivo bacteriano tiene éxito, crecerán "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas colonias tienen características de color, forma,tamaño etc. propias de cada bacteria y esto nos ayuda a identificarlas.
Sistemas de Siembra: Antes de iniciar la siembra se deben cumplir determinadas condiciones, que son:

• Esterilización de los instrumentos de trabajo y de los medios de cultivo. Los medios de cultivo se esterilizan con calor húmedo en la autoclave y los materiales de vidrio se esterilizan con calor seco en el horno Pasteur.En el caso de objetos metálicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el momento de su utilización, se mantienen en la llama hasta que se pongan al rojo, teniendo la precaución de enfriarlos antes de su uso.
• Que el inóculo no se contamine, modifique o destruya para lo cual se utiliza calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, la pipeta y demás elementos antesy después de su utilización.
• Esterilización del área de trabajo para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Se utilizan la cámara de flujo laminar. Si no se dispone de ella, se utiliza un mechero Bunsen que, debido a que fuerza la circulación del aire en sentido vertical y hacia arriba, es capaz de crear un ambiente semiésteril en la zonainmediata alrededor y debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminación disminuyen considerablemente.

PROCEDIMIENTO

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO
Grafica 1: en este dibujo se puede apreciar la esterilización del asa con el mechero, y posteriormente la toma del inoculo para así poder hacer la siembra por agotamiento.
Se diluye el inoculo sobre la superficie de un agar para lograr obtenerunidades Formadoras de Colonia aisladas.
Primero que todo el asa debe ser esterilizada con la ayuda del mechero, para así proceder a hacer las estrías. Luego se procede a enfriar el asa en el borde del medio de cultivo que se va a utilizar.
Después se toma una muestra de este y se deposita en un extremo de la caja y se procede a realizar las estrías en cuatro lados con el fin de obtener...
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