Metodos de screening

INDICE:
1. INTRODUCCIÓN.

2. FUNDAMENTO DE LOS INMUNOENSAYOS.


3. TIPOS DE INMUNOENSAYOS.

4. EJEMPLO DE IDENTIFICACIÓN DE UN TOXICOS UTILIZANDO UN INMUNOENSAYO.


5. VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS INMUNOENSAYOS.

6. METODOS QUIMICOS SIMPLIFICADOS.


7. CROMATOGRAFÍA CAPA FINA.

8. PRUEBAS DE COLOR.


9. BIBLIOGRAFÍA.




1.-INTRODUCCIÓN:
La creciente frecuencia conque se requiere la realización de análisis toxicológicos lleva a algunos laboratorios a sustituir las sistemáticas analíticas generales, seguras pero laboriosas, por métodos simplificados conocidos como de tamizado o screening, algunos de los cuales se contentan con investigar la presencia de sólo unos pocos grupos químicos de xenobióticos.
Los métodos de tamizado o screening se definen como lacombinación de procedimientos analíticos encaminados a identificar un cierto número de tóxicos que se encuentren en altas concentraciones en determinadas muestras; es fundamental no olvidar la escasa especificidad de estos métodos por lo que los resultados deben ser siempre confirmados por un método más especifico.
Entre ellos se pueden distinguir dos variantes:
A. Métodos abreviados, dirigido aun pequeño número de tóxicos de frecuente incidencia, especial interés o difícil detección.
B. Tamizado amplio, capaz de identificar hasta unas cincuenta sustancias.
Son métodos aplicables solo a disoluciones y orina y raramente a sangre y a vísceras; son más económicos que los generales, pero con mayor riesgo de que pasen inadvertidos algunos tóxicos y no se detecte (Ver tabla 1).
Los métodossimplificados suelen emplear reacciones coloreadas, técnicas inmunológicas, de extracción por determinados soportes o columnas, etc.
A las ventajas de la rapidez y economía de los métodos rápidos, se contraponen los inconvenientes de su limitada capacidad de discriminación, tanto en el aspecto cualitativo como cuantitativo, y el reducido número de xenobióticos que investigan.





Ejemplosde sustancias que pueden no detectarse en análisis no sistemáticos, dependiendo del método de tamizado.
 Anestésicos.
 Antidepresivos no triciclicos.
 Antiepilépticos:
 Antihistamínicos.
 Cannabis.
 Carbamatos.
 Cocaína.
 Hidrato de cloral.
 Metacualona.
 Morfinomiméticos: Buprenorfina, Propoxifeno.
 Neurolépticos.
 Alpidem, Lormetazepam, Loprazolam.
 Triazolam, Zolpidem,Zopiclona.
Tabla 1

2.- FUNDAMENTO DE LOS INMUNOENSAYOS:
Se fundamentan en la reacción antígeno-anticuerpo, en la que el antígeno es el tóxico a determinar y los anticuerpos son inmunoglobulinas (generalmente IgG) obtenidas de animales inmunizados por la sucesiva aplicación de dicho tóxico, o a partir de un clon de células obtenidas a partir de un animal inmunizado (anticuerposmonoclonales).
Cuando una sustancia extraña, o antígeno Ag (a), mostrada esquemáticamente en la siguiente figura 1:





Figura 2.
Se introduce en el cuerpo de un mamífero, el sistema inmune sintetiza moléculas de naturaleza proteínica Figura 2 (b) llamadas anticuerpos (Ab), los cuales se unen de manera específica a las moléculas de antígeno por medio de interacciones electrostáticas, puentes dehidrógeno y otras interacciones no covalentes de corto alcance. Estas moléculas grandes (masa molar aproximadamente 150000 Dalton) forman un complejo con los antígenos, como se muestra en la reacción siguiente y en la figura 2 (c):
Ag + Ab ↔ AgAb K= [AgAb]/[Ag][Ab]
El sistema inmune no reconoce moléculas relativamente pequeñas, por lo que se debe usar un” truco” para preparar anticuerpos consitios de unión específicos para un determinado fármaco o xenobiótico. Como se muestra en la figura 2 (d), el fármaco o xenobiótico se une de manera covalente a una molécula portadora antigénica, como la albumina sérica bovina (BSA por sus siglas en inglés), una proteína que se obtiene de la sangre de bovinos.
F + Ag  F-Ag
Cuando el conjugado resultante fármaco-antígeno (F-Ag) se inyecta en el...