Metodos utilizados en la purificacion de proteinas

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MÉTODOS UTILIZADOS EN LA PURIFICACIÓN Y EN LA DETERMINACIÓN DE LA COMPOSICIÓN DE LAS PROTEÍNAS.

MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS.

Desde el siglo pasado las separaciones analíticas se llevaban a cabo por métodos clásicos como son la precipitación, destilación y extracción. Los crecientes esfuerzos por conocer más sobre la composición y función de las proteínas han obligado a loscientíficos a buscar técnicas, cada vez, más precisas.
Actualmente las separaciones analíticas se realizan fundamentalmente por cromatografía y electroforesis.
La cromatografía comprende un conjunto importante y diverso de métodos que permite a los científicos separar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios. Se puedenseparar moléculas en función de sus cargas, tamaños y masas moleculares. También a través de la polaridad de sus enlaces, sus potenciales redox, etc.
Las tres clases de cromatografía desde un ángulo más general son cromatografía de líquidos, cromatografía de gases y cromatografía de fluidos supercríticos. Como su nombre lo indica, la fase móvil en las tres técnicas son líquido, gas y fluidosupercrítico respectivamente.

La técnica más usada es la cromatografía líquida de alta resolución, HPLC por su sensibilidad, fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles o termolábiles y su aplicación a sustancias de primordial interés en la industria, como son los aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos,carbohidratos, entre otros. Se ofrece a continuación un esquema relativo a este método de separación:

LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO
La cromatografía de reparto está formada por la cromatografía Líquido-Líquido y la cromatografía unida químicamente. Estas técnicas se diferencian en la forma en que se retiene la fase estacionaria sobre las partículas del soporte relleno. En elsegundo caso, como su nombre lo indica, la fase estacionaria se une químicamente a la superficie del soporte.
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
La cromatografía de adsorción o Líquido-Sólido es la forma clásica de la cromatografía de líquidos. Ha sufrido algunas transformaciones que la han convertido en un método importante de la HPLC.Es adecuada para compuestos no polares probablemente con masasmoleculares inferiores a 5 000.
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN
La cromatografía de exclusión, también llamada de filtración en gel o cromatografía de permeación en gel, se basa en la diferencia de penetración de las moléculas en los poros de la fase estacionaria debido a que la separación obtenida depende del tamaño de la molécula. Este tipo de separación por tamaño difiere de las demás técnicas decromatografía en que no existen interacciones físicas o químicas entre el analito y la fase estacionaria. Es una técnica reproducible, escalable y rápida.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
La cromatografía de intercambio iónico está basada en la atracción entre iones del soluto y puntos cargados que existen en la fase estacionaria. En el caso de intercambiadores aniónicos, grupos cargadospositivamente en la fase estacionaria atraen aniones del soluto. Los intercambiadores catiónicos contienen puntos cargados negativamente que atraen catiónes del soluto.
LA ELECTROFORESIS
La electroforesis fue desarrollada por primera vez por el químico sueco Arne Tiselius, merecedor del Premio Nobel en 1948 por sus trabajos realizados en esta esfera. La electroforesis es una técnica analítica deseparación de fundamento cinético basada en el movimiento o migración de las macromoléculas disueltas en un determinado medio (solución tampón de electroforesis), a través de una matriz o soporte reticulado como resultado de la acción de un campo eléctrico. El comportamiento de la molécula viene dado por su movilidad electroforética y ésta por la carga, tamaño y forma de la misma. Cuanto mayor es la...
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