Metodos y medios de cultivo

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TÉCNICAS Y MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo adecuado debe contener todos lao nutrimentos requeridos por el organismo que va a ser cultivado, y factores tales como pH, temperatura y aeración deberán ser controlados cuidadosamente. Se emplea un medio líquido que puede ser gelificado para fines específicos agregando agar o sílice gel. El agar es un polisacárido que se extrae de una algamarina y es particularmente adecuado para el cultivo microbiano porque resiste la acción microbiana y se disuelve a 100°C, pero no gelifica hasta que se enfría por debajo de 45°C; las células pueden ser suspendidas en el medio a 45° y después enfriarlo rápidamente, hasta obtener un gel sin dañarlas.

• Nutrimento: en general deben proporcionarse los siguientes substancias: (1) aceptores ydonadores de hidrogeno: aproximadamente 2 g/lt. (2) fuente de carbono: aproximadamente 1 g]/lt. (3) fuente de nitrógeno: aproximadamente 1 g/lt. (4) minerales: azufre y fosforo, aproximadamente 50 mg/lt. De cada uno oligoelementos, de 0.1-1 mg/lt. De cada uno; (5) factores de crecimiento: aminoácidos, purinas, pirimidas, aproximadamente 50 mg/lt. De cada uno; vitaminas de 0.1-1 mg/lt. De cada uno.La mayoría de los microbios de vida libre crecen bien en extracto de levaduras, mientras que las formas parasitarias pueden requerir substancias especiales que se encuentran únicamente en la sangre o en extractos de tejidos de animales.

• pH: la mayoría de los organismos crecen mejor a un pH de 6.0-8.0 aunque algunos tienen un pH optimo tan bajo como 2 (Thiobacillus thiooxidans) y otros tanaltos como 8.5 (Alcaligenes faecalis).

• Temperatura: diferentes especies microbianas varían ampliamente en sus fluctuaciones en la temperatura óptima para su desarrollo: las formas psicrófilas crecen mejor a bajas temperaturas (15-20°C); las formas mesófilas lo hacen mejor a 30-37°C y las termófilas a 50-60°C. la mayoría de los organismos son mesófilos: 30°C es la temperatura óptima paramuchas de las formas de vida libre y la temperatura del huésped para los simbiontes de los animales de sangre caliente.

• Aeración: muchos organismos son aerobicos obligatorios, requiriendo específicamente oxigeno como aceptor de hidrógeno; otros son facultativos y capaces de vivir aerobia o anaerobiamente; por último, otros más son anaerobios obligatorios, requiriendo una substanciadiferente del oxígeno como aceptor de hidrogeno y son sensibles a la inhibición por aquel. Para los organismos anaerobios se pueden agregar a los medios líquidos de cultivo agentes reductores como el tioglicolato de sodio; los tubos de agar pueden ser sellados con una capa de vaselina y parafina; o el cultivo puede ser colocado en un recipiente del cual se elimina el oxígeno por evacuación o por mediosquímicos.

• Fuerza iónica y presión osmótica: en menor grado, puede ser necesario controlar factores como la presión osmótica y la concentración salina. Para las formas marinas y los organismos adaptados a crecer con soluciones concentradas de azúcar, por ejemplo, dichos factores deben ser tomados en cuenta. Los organismos que requieren altas concentraciones salinas son llamados halófilos;los que requieren presiones osmóticas altas llevan el nombre de osmofilos.

Métodos de cultivo.

El medio.

La técnica usada y el tipo de medio seleccionado dependen de la naturaleza de la investigación. En general, pueden presentarse tres situaciones: (1) se puede necesitar levantar una cosecha de células de una especie particular que se tiene a mano; (2) puede ser necesario determinar elnúmero de tipos de organismos presentes en un material dado, o (3) se puede desear aislar un tipo particular de microorganismos de una fuente natural.

* Crecimiento celular de una especie dada: en general puede idearse un medio adecuado reproduciendo cuidadosamente las condiciones que el organismo encuentra en su medio natural. Es fácil reproducir el pH, la temperatura y la aeración; los...
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