Micologia

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TRABAJO PRÁCTICO
Aislamiento
Los géneros que se encuentra con relativa frecuencia en la naturaleza, por ejemplo sobre los frutos en putrefacción, semillas, forrajes, cueros, maderas, etc. También se lo encuentra normalmente en el suelo. Para aislarlo se tiene en cuenta su estado natural, procediendo luego de acuerdo con las técnicas siguientes: Por dilución en agar: Una serie de 4 a 6 tubos decultivo, cada uno de los cuales contiene 10 ml de un medio de agar adecuado (Medio de Czapeck, medio de Sabouraud, medio de malta), se calienta en baño de agua para fundir el agar. Enfriar el contenido de los tubos a 45º C; se añade a cada uno de ellos una pequeña cantidad del material que contiene el moho agitando cuidadosamente, se lleva una pequeña porción a un segundo tubo y el resto sevierte asépticamente en una placa de Petri; se agita el segundo tubo y se separa una pequeña porción para el tercero, vertiendo el resto en la placa de Petri. Se continúa del mismo modo hasta obtener 4 o 6 muestras, y como el cultivo se va diluyendo de una a otra, en alguna de ellas habrá ya un cultivo puro. Por separación de esporas de una colonia. Una vez seleccionada una colonia que se presumepura, se recogen de la misma unas cuantas esporas mediante una aguja esterilizada, llevándolas a un tubo que contiene un medio favorable para el crecimiento. La operación se efectùa con ayuda de una lupa o bien con el microscopio. Mediante el micromanipulador: El micromanipulador más conocido es el de Peterfi, construído por la Zeiss; es de tipo mecánico ya que las agujas, pipetas, ansas y escalpelose mueven por juegos de tornillos en todas direcciones. Consta de una camarita en la cual se coloca una gota del material a aislar; se observa a través del miscroscopio. Mediante los dispositivos laterales del micromanipulador se mueven en todo sentido dos microagujas o dos micropipetas que permiten recoger o aspirar un solo microrganismo de la suspensión. Por germinación de una sola espora: Sehace una dilución de esporas en agua estéril o salina hasta que cada gota contenga solo una espora, lo que puede comprobarse con auxilio del microscopio. Se ponen entonces varias gotas sobre la superficie de agar, marcando su posición para poder localizar el cultivo correcto en el caso de existencia de algún contaminante. Por modificación del método de una sola espora de Keitt: Esta modificaciónse debe a Ezekial (1930). Con ayuda de una aguja de extremo plano cargada con el material que contiene las esporas, se hacen varios trazos paralelos sobre la superficie de un medio agarizado convenientemente, se invierte entonces la placa incubándola durante 16-24 hs. y observándola a través del fondo con el microscopio

(objetivo de 16 mm). Una vez descubiertas las esporas, se marca con tintasu posición. Por medio de una aguja de punta cilíndrica (que obra como sacabocado) se corta el cilindro de agar que contiene el esporo. Este cilindro se siembra en una caja de Petri y se observa para estar seguro de que existe un solo elemento, y luego de desarrollado se resiembra en un tubo con medio de cultivo apropiado. Se incuba y aparecerá la colonia de desarrollo monocitogenético. Métodode Hansen: En este método (Hansen 1926) se prepara una suspensión de esporas en agar, que se aspira en tubos capilares de diámetro no mucho mayor que el de las esporas. Los tubos capilares se observan al microscopio y cuando se descubre una espora aislada se rompe el tubo de manera que el segmento contenga solo una espora. El cristal se trata con alcohol y luego se coloca en un medio fresco. Laespora se desarrolla dando lugar a una colonia. Este método resulta eficaz con esporas grandes y coloreadas, en cambio no lo es con esporas pequeñas.

Identificación preliminar de cultivos de hongos
Para la identificación de un moho se precisa una descripción completa del organismo. Para estudiar sus características, se prefiere el medio de Czapeck que es un medio satisfactorio y da muy buenos...
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